盖文彬,毕明霞,姜宏

    (青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东青岛 266071)

    胆固醇酯化酶甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)是胆固醇酯生物合成的关键酶[1],对维持细胞内脂代谢的稳态至关重要。SOAT1在多种肿瘤中异常高表达,与原发性肝癌、胰腺癌、肾癌和前列腺癌等的预后不良密切相关,提示SOAT1或可作为多种肿瘤的预后生物标志物和治疗靶点。在肝癌细胞中SOAT1通过促进胆固醇的合成,进而影响癌细胞的生长和迁移,促进肿瘤的发生发展[2-5]。因此,研究肝癌细胞中SOAT1蛋白稳定性的调控机制,可以为深入了解肝癌的发病机制及寻找新型药物治疗提供新的思路。

    在肿瘤中SOAT1 转录水平并没有明显变化,而蛋白表达上调却十分显著,提示肿瘤中异常高表达的SOAT1 主要受到蛋白水平的调控[3]。泛素-蛋白酶体系统是生物体内维持蛋白质稳态的重要途径,蛋白发生泛素化修饰后会被蛋白酶体降解。泛素化修饰是一种依赖ATP 的级联反应,需要泛素激活酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的参与[6-8]。泛素化修饰是一种可逆的动态过程,除了上述酶分子,去泛素化酶(DUB)也参与其中,它与泛素连接酶E3共同维持蛋白质的稳态[9]。已有研究证实,SOAT1的表达受到泛素-蛋白酶体系统的调控[10],但维持其蛋白稳定性的DUB却未见报道。本研究旨在鉴定SOAT1的DUB,揭示在肝癌细胞中SOAT1蛋白异常高表达的分子机制,为研发靶向SOAT1的肿瘤治疗药物提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    Protein A/G-agarose beads、GAPDH、SOAT1抗体、Normal IgG、相关二抗购自Santa Cruz公司;Flag抗体、蛋白酶体抑制剂MG132购自Sigma公司;HA-Ubiquitin 抗体购自MBL 公司;Lipofectamine2000购自Invitrogen 公司;OTUD3 抗体购自abcam 公司;RPMI-1640(1∶1)培养液、胎牛血清(FBS)、MEM 和DMEM 购自Gibco公司;Super-Signal west pico chemiluminescence substract购自Thermo公司;PBS粉末、抗原修复液购自北京中杉金桥公司 ......