宋慧,秦倪,于彩霞,师朵,刘雯

    (青岛大学基础医学院病原生物学系,山东 青岛 266071)

    EB病毒(EBV)是一种普遍存在的γ疱疹病毒，世界上绝大多数人都曾感染EBV并获得适应性免疫。1964年，EBV首先在伯基特淋巴瘤中被发现[1]，随后发现其与多种人类肿瘤相关，包括霍奇金淋巴瘤、未分化的鼻咽癌以及10%左右的胃癌[2]。EBV在肿瘤细胞中表达多种潜伏基因，其中EBV编码的核抗原1(EBNA1)是唯一一个在所有EBV相关肿瘤细胞中都表达的潜伏基因。EBNA1可以与多种细胞蛋白相互作用，进而调节相关基因的表达，并且对维持EBV的潜伏感染状态起着重要作用。2014年，癌症基因组图谱(TCGA)将胃癌分为了4种分子亚型：EB病毒相关胃癌(EBVaGC)、微卫星不稳定型(MSI)、染色体不稳定型(CIN)和基因组稳定型(GS)等[3]。EBVaGC的单独分类显示其具有独特的致癌机制，并提供了将EBV用作靶向治疗胃癌的新生物标志物的机会。

    E2F转录因子于1986年被首次发现，可与腺病毒E2启动子相互作用[4]。目前，已发现8个E2F转录因子家族成员(E2F1～8)，其中大多数与控制细胞周期有关，同时对细胞分化、凋亡和DNA损伤等也发挥重要作用。E2F转录因子1(E2F1)是第一个被鉴定的E2F家族成员，视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)可与 E2F1相结合，进而抑制其活性[5]。多项研究显示，E2F1在多种肿瘤组织和细胞中高表达，如肺癌、乳癌、前列腺癌等[6-8]。E2F1的表达与肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关。然而，在胃癌中EBV对E2F1的调控及其作用机制，以及E2F1在胃癌中发挥的作用目前尚不明确。本文构建EBNA1稳定表达的细胞模型，检测EBVaGC细胞、EBV阴性胃癌细胞(EBVnGC)及EBNA1稳定表达细胞中E2F1的表达，探讨E2F1在EBVaGC中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养

    本研究采用了EBVaGC细胞系GT38、GT39和SNU719以及EBVnGC细胞系SGC7901、AGS和BGC823。所有的细胞系均加入含有体积分数0.10胎牛血清以及10 g/L青霉素-链霉素混合液的DMEM培养基 ......