勾 英，刘正芸，肖冬焱，周艳萌，罗 果，高兴红，王 欢,3

    (1.遵义医学院 医学微生物学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099；3.贵州省普通高等学校 传染病与生物安全特色重点实验室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    慢病毒介导过表达NTCP的NTCP-SK-Hep1细胞系构建

    勾 英1,2，刘正芸2,3，肖冬焱1,2，周艳萌1，罗 果2,3，高兴红2,3，王 欢1,2,3

    (1.遵义医学院 医学微生物学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099；3.贵州省普通高等学校 传染病与生物安全特色重点实验室，贵州 遵义 563099)

    目的 建立钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)过表达的肝癌细胞系，以作为研究乙肝病毒(HBV)感染的细胞模型。方法 构建NTCP慢病毒重组质粒 Gv-NTCP，挑取克隆进行PCR扩增和序列测定；将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK293T细胞，包装Gv-NTCP慢病毒并进行病毒滴度测定；Gv-NTCP慢病毒感染人肝癌细胞株SK-Hep1，嘌呤霉素筛选，通过荧光显微镜，PCR和Western blot检测NTCP的表达。结果 测序结果证实Gv-NTCP慢病毒载体构建成功；在HEK293T细胞中包装的Gv-NTCP慢病毒滴度为2.0×108TU / mL；该病毒感染SK-Hep1细胞后，在荧光显微镜下可见感染细胞表达绿色荧光，PCR结果显示感染组的NTCP表达明显增高，WB结果显示感染组的NTCP蛋白表达明显增高。结论 成功建立了NTCP过表达的人肝癌细胞系NTCP-SK-Hep1。

    钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白；肝癌细胞；慢病毒载体

    钠离子-牛磺胆酸钠共转运多肽(Na+/taurocholate cotransportingpolypeptide,NTCP)是多次跨膜糖蛋白，主要在肝细胞的基底膜上表达。它是溶质载体蛋白(solute carrier family 10， SLC10)家族中发现的第一个转运体蛋白，主要介导钠依赖性胆汁酸从血液中的摄取，参与类固醇硫酸盐的摄取[1]，在胆汁酸的肠肝循环中发挥重要作用[2]。研究发现，NTCP是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)及丁型肝炎病毒(hepatitis D virus，HDV )的功能性受体[2]，且NTCP和HBV的L蛋白之间的相互作用是其进入肝细胞的关键[3] ......