单 良,徐雨笠,李 玎,童 军

    (同济大学附属上海市第四人民医院 耳鼻咽喉科，上海 200434)

    耳聋严重影响人们的生理心理健康。后天性噪音、老年性、耳毒性药物及自身免疫性疾病性耳聋发病率日益增高[1]。耳蜗毛细胞将声音刺激转换为生物电信号，产生听力，因此科学家们一直致力于听毛细胞的再生和损伤修复的研究，近年内耳基因治疗成为热点，即通过导入内耳功能性基因并表达，促进听毛细胞的再生或修复。这些研究已经取得一些突破，如Abdolazimi等[2]通过调控转录因子ATOH1促进毛细胞再生，陈嘉伟等[3]经圆窗膜鼓阶显微注射的方法将腺相关病毒转染小鼠耳蜗，取得良好效果，给了我们促进听毛细胞修复的新理论基础和思路。瞬时受体电势C通道蛋白6(Transient receptor potential canonical ，TRPC6)可在细胞膜上构成非选择性阳离子通道，发挥多种生理功能。在大鼠脑缺血性损伤模型中，TRPC6 蛋白的降解被阻止，进而起到保护神经元[4]作用。TRPC6也是肾脏足细胞重要的裂孔隔膜蛋白，其编码基因发生突变可导致足细胞损伤[5]。TRPC6同样被发现在耳聋康复中发挥作用，但Sexton[6]认为其作用是通过毛细胞代谢还是直接通过保护中枢神经元尚无法确定。本研究将探讨携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein)的TRPC6过表达慢病毒(PHBCMV-TRPC-EGFP)经大鼠圆窗膜注入后，能否成功转染大鼠毛细胞，表达后直接促进毛细胞的修复，治疗大鼠听力损伤。

    1 材料与方法

    1.1 材料 实验动物：健康SD大鼠25只，雄性，200～250 g，(海军医科大学动物实验中心 许可证号：SCXK(沪 2012-0007)。听性脑干反应(ABR)检查示听力正常。TRPC6过表达慢病毒(PHBCMV-TRPC-EGFP)和空病毒(PHBCMV-EGFP)(上海生博生物科学技术有限公司)滴度1.81×108 TU/mL。

    1.2 实验方法

    1.2.1 噪音性耳聋动物制备(上海海军研究所) 实验大鼠清醒状态下单只放入特制的鼠笼内 ......