CSE基因敲除小鼠的基因型鉴定方法
凝胶电泳,泳道,条带,1材料与方法,2结果,3讨论
覃 明 ,王海燕 ,田 丹,郑 静,汪化军,冯仁和,庹宇宇,张 悦,李妍霓,张浪浪,杨婷婷(1.遵义医科大学 基础医学院免疫学教研室,贵州 遵义 563099;2.遵义医科大学 公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室 贵州 遵义 563099)
硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)是继一氧化氮和一氧化碳之后的第三个“气体信号分子”[1]。目前认为,哺乳动物细胞主要依赖胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)和胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)分别以L- 半胱氨酸和同型半胱氨酸为底物催化产生H2S[2],以此参与机体内源性H2S的合成。CSE和CBS表达具有不同的组织分布[3],CBS主要表达于中枢神经系统;CSE主要表达于心血管系统、呼吸系统、胃肠道等外周器官[4-5]。H2S功能诸多,一直是研究的热点,H2S在心血管系统中有舒张血管、抑制血管重构和保护心肌等重要调控作用,并与多种心血管疾病相关[6-7];在免疫系统中与调节性T淋巴细胞的发育与功能密切相关[8],还与结肠癌癌细胞的生长、代谢密切相关[9],本课题组近年来的工作也发现CSE通过调节内源性H2S的合成在调控炎症方面有重要作用[10-11 ]。虽然CSE和CBS基因敲除小鼠在这些研究中被大量应用,但关于CSE基因敲除小鼠基因型鉴定方法的介绍都比较简略。因此,本研究介绍一种快速、较为准确的具体鉴定方法,以期为应用该动物的实验研究提供参考。
1 材料与方法
1.1 实验动物及伦理声明 SPF级C57BL/6背景CSE杂合子小鼠(CSE+/-)由复旦大学药学院朱依谆教授课题组惠赠,杂合子小鼠交配繁殖后,随机取其子代小鼠(6-8周龄)21只用于实验;野生C57BL/6小鼠购买于长沙市天勤生物技术有限公司,许可证号:SCXK(湘)2019-0013 ......
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