1.3 血浆 H2S 浓度检测
改良亚甲基蓝法测定血浆硫化氢，先加过量醋酸锌溶液使血浆中游离 H2S、HS-、S2- 形成 ZnS 沉淀; 再加入5mol/L NaOH 强碱溶解变性的蛋白;离心去除大量蛋白质; 再加入 0.2% N，N- 二甲基对苯二胺盐酸盐溶液使 ZnS 完全溶解，用三氯乙酸沉淀剩余蛋白质，最后用分光光度计法测定 H2S 浓度。
1.4 H&E 染 色 (Hematoxylin-eosin staining)
在 4% 浓度的多聚甲醛固定后，股骨样品脱钙，然后再递增浓度的乙醇中脱水，再二甲苯中清洗并植入组织学石蜡中，使用厚度为 5μm 切片进行 H&E 染色。
1.5 骨密度检测
, 百拇医药
骨密度检测使用美国产 Hologic 双能 X 射线 4500W 骨密度仪(DEXA)分次测定第 4、第 5 腰椎椎体和双侧股骨骨密度(BMD)。
1.6 生物力学检测
取股骨样本进行生物力学检测，方法为三点弯曲实验， 测量股骨骨折时所承受的最大应力。仪器为 ElectroForce 3200 Series II Test Instrument，BOSE。
1.7 统计学方法
各组数据以均数 ± 标准差表示，使用 SPSS 22.0 软件进行处理，根据方差齐性检验结果，两组间比较采用两样本 t 检验。P ﹤ 0.05 认为差异具有统计学意义 ， P ﹤ 0.01 认为差异具有显著性。
2 结果
2.1 各组血浆 H2S 浓度的变化
和 Sham-GYY 组比较，OVX-vehicle 和 OVX-ALEN 血浆中硫化氢(H2S)含量均有下降或显著降低，而 OVX-
GYY 组血浆中硫化氢含量变化不明显。如图 1。通过腹腔注射 GYY 在第 2 周和第 4 周显著提高了的 OVX 大鼠血浆 H2S 浓 度 ，(13.47±3.64 vs. 5.00±1.33;11.28±1.95 vs.
5.08±2.36;所有 p<0.01，如图 1)，随着时间推移，在第
8 周和第 12 周外源性 GYY 對大鼠血浆 H2S 浓度的提升影响仍显示有效(11.20±3.53 vs. 5.63±2.32;13.08±2.99 vs.
5.98±2.06;所以 p<0.05，如图 1)。
组 sham-GYY 比较; # 表示 p<0.05， 与实验对照组 OVX-
vehicle 比较;## 表示 p<0.01， 与实验对照组 OVX-vehicle 比较)
2.2 股骨组织的切片 H&E 在显微镜下观察
实验对照组在显微镜下可以观察到骨小梁结构的明显崩塌减少稀疏，这确认 OVX 骨质疏松造模的成功，而OVX-ALEN 和 OVX-GYY 组可以观察到大鼠股骨骨小梁的恢复，这个结果定性显示了补充外源性 H2S 和阿伦瞵酸钠均对骨质疏松病情的恢复和改善有治疗效果(如图 2)。
2.3 GYY4137 减缓去卵巢疏松和腰椎股骨骨密度减低于正常对照组比较，大鼠第 4、5 腰椎于去卵巢后
(OVX-vehicle)第 8 周及之后第 12 周均显示骨质密度减低
(0.195±0.007 vs. 0.244±0.023;0.193±0.017 vs. 0.239±0.013; 0.182±0.022 vs. 0.223±0.016;0.180±0.023 vs. 0.232±0.026;
所有 p<0.05;如图 3);差异存在统计学意义。同时在第, http://www.100md.com(戴枫 黄国鑫 徐忠世)