鲎试剂方法检测注射用阿昔洛韦中细菌内毒素
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【中图分类号】 R969 4 【文献标识码】 B 【文章编号】1185-1672(2006)-08-0694-03
摘要 目的 建立注射用阿昔洛韦中细菌内毒素鲎试剂检查法。方法 采用不同批号、不同厂家的鲎试剂对注射用阿昔洛韦进行干扰试验，考察确立注射用阿昔洛韦细菌内毒素检查法。结果 注射用阿昔洛韦浓度为0 8 mg·ml-1时，对鲎试剂无增强抑制作用，其细菌内毒素限值为0 3EU·mg-1。结论 可用细菌内毒素检查法(凝胶法)代替家兔热原检查法控制其热原。
关键词 注射用阿昔洛韦；细菌内毒素；干扰试验
Test of Bacterial Endotoxin on Aciclovir For Injection
Zhang QiuYue，Zhang Ye
Henan Proaincial Hospital Anyang,Henan,455000,China
Abstract Objectives To establish a method for test of bacterial endotoxin on aciclovir for injection Methods By interfere test,to study the inhibitive action of Aciclovir For Injection in bacterial endotoxins testResults The injection did not interfere with tachypleus amebocyte lysate in the concentration diluted to 0 8 mg·ml-1Conclusion Bacterial Endotoxin test (gel-clot method) can be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Aciclovir For Injection
Key Words Aciclovir for injection；Bacterial endotoxin；Interference test
注射用阿昔洛韦为化学合成的一种广谱抗病毒药，临床主要用于免疫功能受损患者的粘膜和皮肤初发或复发的单纯疱疹病毒，水痘带状疱疹感染，免疫功能正常患者的带状疱疹和生殖器疱疹，单纯疱疹性脑炎，疱疹性结膜炎等。
《中国药典》2005年版规定的方法为热原检查法。细菌内毒素检查法为替代热原检查法的一种检测方法，目前已被各国药典所采用。为此，参照《中国药典》2005年版细菌内毒素检查法[1]，考察了注射用阿昔洛韦对细菌内毒素检查的干扰情况，为其建立细菌内毒素检查法提供实验依据。
1 实验材料
ZH-2型旋涡混合器(天津药典标准仪器厂)；DS1型恒温水浴箱(北京市医疗设备总厂)；细菌内毒素标准品(中国药品生物制品检定所，批号20030829，每支8EU)；细菌内毒素检查用水(海洋生物制品厂，批号20031020，每支2ml)；鲎试剂(海洋生物制品厂，批号20040109，灵敏度0 25 EU·ml-1；湛江安度斯生物有限公司，批号20030824灵敏度0 25 EU·ml-1)；注射用阿昔洛韦(武汉生物化学制药公司，批号0408032、040911；武汉普生药业公司，批号041201)
2 实验方法与结果
2 1 细菌内毒素限值(L)的确定 根据公式L=K·M-1，式中L为细菌内毒素限值；K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂为5EU·Kg-1·h-1、；M为本品每小时人用最大剂量，即M=15 mg·Kg-1、·h-1；计算L=5/15=0 3EU·mg-1。
2 2 鲎试剂灵敏度复核 用细菌内毒素检查用水将内毒素工作标准品稀释成0 5、0 25、0 125、0 06 EU·ml-1的系列浓度，每一浓度取0 1ml，加入已有0 1ml鲎试剂溶液的试管中，每一浓度平行做4管，同时做阴性对照，轻轻混匀，置37±1℃水浴中，保温1h，结果见表1。
2 3 干扰试验预试验 将供试品用细菌内毒素检查用水依次稀释成1 6、0 8、0 4、0 2mg·ml-1系列溶液，记为NPC，另制备一同样浓度系列的样品溶液，但在制备过程中加入含2λ浓度的内毒素工作标准品，记此系列为PPC，取不同厂家鲎试剂，分别与上述NPC和PPC进行反应，其中NPC出现阳性或PPC出现阴性则表示有干扰影响，结果见表2。
表2结果表明，注射用阿昔洛韦对鲎试剂与内毒素反应，在0 8mg·ml-1时，无干扰作用。用两个厂家的鲎试剂对3批样品检测结果一致。表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果
鲎试剂内毒素浓度(EU·ml-1)0 50 250 1250 06阴性对照结果海洋++---λ=0 25[BHDWG5 8mm][]++---合格[]++--[]++--安度斯++---λ=0 25[BHDWG5 8mm][]++---合格[]++--[]++--表2 预干扰试验测定结果
鲎试剂批号系列内毒素浓度(EU·ml-1)0 50 250 1250 06阴性对照结果海洋0408032NPC- -- -- -- -- -+ +PPC- ++ ++ ++ +040911NPC- -- -- -- -PPC- ++ ++ ++ +041201NPC- -- -- -- -PPC- ++ ++ ++ +安度斯0408032NPC- -- -- -- -- -+ +PPC- ++ ++ ++ +040911NPC- -- -- -- -PPC- ++ ++ ++ +041201NPC- -- -- -- -PPC- ++ ++ ++ +2 4 供试品干扰试验 将3批样品用细菌内毒素检查用水分别稀释成最终浓度为0 8 mg·ml-1溶液。用细菌内毒素检查用水和样品稀释液分别将内毒素工作标准品配制成浓度为0 5、0 25、0 125、0 06EU·ml-1的溶液，用2批不同厂家的鲎试剂进行试验，并同时做阴性对照(NC)和供试品对照(TC)各2管，试验结果按公式Es=lg-1(∑Xs/4)和Et=lg-1(∑Xt/4)计算。其中Xs和Xt分别为细菌内毒素检查用水和样品系列各反应终点细菌内毒素浓度的对数值(lg)，结果见表3。表3结果表明，Es在0 5λ～2 0λ之间，且Et也均在0 5Es～2 0 Es之间，说明样品在本实验条件下，对不同厂家生产的鲎试剂与细菌内毒素反应无干扰抑制作用。表3 干扰试验结果
表4 注射用阿昔洛韦细菌内毒素检测结果
3 讨论
注射用阿昔洛韦的细菌内毒素限值(L)定为0 3 EU·mg-1是较为合理的，和热原检查控制量相一致，能保证临床用药安全。
注射用阿昔洛韦在进行细菌内毒素检查时，当其终浓度在1 6 mg·ml-1以上时，有干扰抑制作用，当其终浓度在0 8mg·ml-1及以下时，此干扰作用可排除。
注射用阿昔洛韦在进行细菌内毒素检查时，鲎试剂灵敏度至少应在0 25 EU·ml-1 ，用灵敏度更高的鲎试剂，对供试品做更大倍数的稀释，则效果更好。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会中国药典 二部[S]2005 北京：化学工业出版社，附录85
(收稿日期 2006-02-10)(编辑 张 达)
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