4、RT-PCR检测端粒酶反转录酶mRNA的表达

    按照Trizol试剂说明书中的具体步骤提取各组细胞的总RNA，以紫外分光光度计检测样品吸光度并计算纯度及 浓度。根据反转录合成试剂盒说明书进行反转录，PCR反应条件：95 ℃-94 5 min ℃-55 30 s ℃-72 40 s℃ 30 s，36个循环，72 ℃延伸7 min。每一PCR反应重复 3次。

    将所得PCR产物在4 ℃条件下进行琼脂糖凝胶电 泳，在凝胶自动成像仪上拍照提取图像。以β-actin作为 内参照。

    5、CCK-8法检测细胞生长情况

    将各组细胞接种 在96孔板上，每孔100 μL，每组设3个平行孔，于37 ℃，体积分数为5%CO2细胞培养箱中培养48 h，弃掉细胞培 养液，加入CCK-8 10 μL，于培养箱温育2 h，在酶标仪 上测定吸光度值。

    6、生长曲线测定

    将各组同一时期转染前后的前 软骨干细胞制成单细胞悬液 ......