TCT联合HPV—DNA及端粒酶检测在宫颈癌前病变
摘要：目的：研究液基薄层细胞学(TCT)联合高危型人乳头瘤病毒(HPV)-DNA及端粒酶检测在宫颈癌前病变评估中的应用价值，病变检测中的临床应用价值。方法：对宫颈不同病变，包括慢性宫颈炎55例，宫颈上皮内瘤变(CIN)162例、(CINⅡ)112例、(CINⅢ)41例，同时进行TCT、HPV‐DNA、端粒酶的检测，并对3项结果进行比较。结果：TCT单独检查CIN阳性率为64.6%，其中CINⅡ～Ⅲ诊断阳性率为77.8%；HPV‐DNA诊断CINⅡ～Ⅲ的阳性率为96.7%，高于该组TCT的阳性率(77.8%)，差异有统计学意义(P<0.05)；CIN端粒酶阳性表达率高于慢性宫颈炎(P<0.05)；3项指标联合检测的灵敏度为94.0%，特异度为100.0%，阴性预測值为80.9%，阴性联合检测预测值明显高于其他2项。结论：TCT联合HR—HPV DNA检测可明显提高宫颈癌前病变的阳性检出率，降低漏诊率，是进行宫颈病变筛查的先进、高效方法。
关键词：宫颈上皮内瘤变；人乳头瘤病毒液基薄层细胞学；端粒酶；宫颈癌前病变
宫颈癌是妇科高发的恶性肿瘤之一，研究通过液基薄层细胞学(TCT)联合人乳头状瘤病毒(HPV)及端粒酶检测，讨论TCT、HPV‐DNA及端粒酶检测在宫颈癌前病变筛查中的应用价值宫颈上皮内瘤变(CIN)尤其是高级别(CINⅡ～Ⅲ)防治宫颈癌的重要方法是早期诊断与早期治疗。现报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料
本院2012年—2014年收治的宫颈病变患者270例，年龄19～73岁，平均39岁，均为女性；根据组织学病理诊断分为慢性宫颈炎55例、(CIN1)62例、(CINⅡ)112例、(CINⅢ)41例。
1.2仪器
试剂TCT与仪器检测使用孝感德立森电子有限责任生产的DCT型及配套材料HPV基因分型(23型)检测试剂盒、HPV—DNA检测试剂盒、亚能生物YN—H16恒温杂交仪、珠海黑马球医学Hema9600聚合酶链反应(PCR)仪、均在亚能生物科技有限公司采购。
1.3检测方法
TCT检测将脱落的塑料采集器上细胞浸泡在装有细胞保存液的小瓶中，经DCT型液基细胞超薄制片机进行程序化处理，制成直径2 cm的细胞薄层，接着用95乙醇固定，经巴氏染色法染色后晾干、封片，最后进行经显微镜镜检，诊断和分类标准按照阴道细胞学的分类及报告细则(TBS)诊断。主要步骤如下：常规3μm连续切片、脱蜡、水化，枸橼酸盐缓冲液高温、高压抗原修复，3%H2O2隔断内源性过氧化物酶，滴入一抗，冰箱过夜4℃，滴入聚合物增强剂，室温下孵育20天，室，滴入酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30天，苏木精复染、DAB显色、封片。一抗作阴性对照用磷酸盐缓冲液取代，阳性对照已知阳性切片。光镜高倍镜下计数细胞阳性率，表达端粒酶阳性细胞呈棕黄色颗粒，超过5%为阳性，小于5%为阴性。
1.4统计学处理
以P<0.05为差异有显著性，应用SPSS19.0统计软件进行统计分析，组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1不同病理类型
端粒酶检测阳性率均随CIN病理类型分级的增高而呈上升趋势相比，差异有统计学意义(P<0.05)。端粒酶检测CIN的阳性率高于慢性宫颈炎组织端粒酶阳性率，差异有统计学意义(P<0.05)，HPV—DNA与端粒酶检测CIN的阳性率分别为91.6%，均高于TCT的64.6%，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步提高检测CIN的灵敏度和阴性预测值，3项指标联合测试，但特异度明显下降(P<0.05)。
3 讨论
宫颈癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，发展一般过程为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ从而发展到原位癌甚至浸润性癌。综上，通过TCT、HPV—DNA及端粒酶的联合检测对宫颈癌前期病变患者的早期诊断及病情转归具有一定的临床意义。SA联合检测可对放化疗患者感染疗效的检测和预后评估做出准确的判断；可能是由于体内特殊的免疫机制抑制了CRP的合成，少数其他原发疾病为非感染性疾病者合并感染。原因尚有待进一步分析。尽管SAA的敏感性均优于其他三个指标，然而在127例SAA和CRP结果不一致的病例中仍然出现有9例CRP增高。而SAA正常的情况，所占比例仅为7.09%(9/127)。对疾病类型进行分析时发现，其中3例恶性肿瘤并发感染者虽然SAA正常，但NEU、WBC、和CRP均升高；1例葡萄球菌性烫伤皮肤综合征患儿和1例多发性脑梗合并肺炎者虽然WBC、NEU和SAA均正常，但CRP却呈高水平表达；以上患者均说明，仅靠SAA一个指标来诊断感染是否发生也是不够严谨的，仍然应该结合WBC、NEU和CRP来联合检测，防止漏诊。另外3例恶性肿瘤患者，在某种程度上可以说明在临床判断恶性肿瘤患者是否合并感染时，SAA较CRP的特异性更高WBC均为正常或减低，虽然NEU、CRP均较高但经病原学检查证实无感染，患者未使用抗菌药物治疗而仅进行营养支撑对症治疗后即明显好转。由此可见在临床判断感染是否发生时SAA可以弥补其他三个指标的缺陷，其他三个指标同样也可以作为SAA阴性时感染存在的补充诊断证据。临床上对于感染性疾病的快速诊断指标的选择应该多项目参考，个项目中任何一项均应结合临床认真做出判，断取长补短，减少抗菌药物的滥用，防误诊或止漏诊[4]。
参考文献：
[1]孙怀美.端粒酶活性及高危型人乳头瘤病毒负荷量在不同宫颈病变中的临床意义[D].青岛大学，2012.
[2]孙怀美，吕智敏，王翔宇，等.高危型HPV负荷量和端粒酶活性表达与宫颈病变意义[J].齐鲁医学杂志，2012，27(5)：407-409.
[3]范翠芳，欧阳耀灵.端粒酶活性、HPV 16/18感染及致癌基因与宫颈癌的关系[J].中国妇幼保健，2006，21(21)：2989-2991.
[4]杨丽娟.HPV多重感染、HPV16 E6/E7变异在宫颈癌发生发展中的作用[D].昆明医科大学，2016., 百拇医药(赵冰英 胡红彦 张丽丽)
关键词：宫颈上皮内瘤变；人乳头瘤病毒液基薄层细胞学；端粒酶；宫颈癌前病变
宫颈癌是妇科高发的恶性肿瘤之一，研究通过液基薄层细胞学(TCT)联合人乳头状瘤病毒(HPV)及端粒酶检测，讨论TCT、HPV‐DNA及端粒酶检测在宫颈癌前病变筛查中的应用价值宫颈上皮内瘤变(CIN)尤其是高级别(CINⅡ～Ⅲ)防治宫颈癌的重要方法是早期诊断与早期治疗。现报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料
本院2012年—2014年收治的宫颈病变患者270例，年龄19～73岁，平均39岁，均为女性；根据组织学病理诊断分为慢性宫颈炎55例、(CIN1)62例、(CINⅡ)112例、(CINⅢ)41例。
1.2仪器
试剂TCT与仪器检测使用孝感德立森电子有限责任生产的DCT型及配套材料HPV基因分型(23型)检测试剂盒、HPV—DNA检测试剂盒、亚能生物YN—H16恒温杂交仪、珠海黑马球医学Hema9600聚合酶链反应(PCR)仪、均在亚能生物科技有限公司采购。
1.3检测方法
TCT检测将脱落的塑料采集器上细胞浸泡在装有细胞保存液的小瓶中，经DCT型液基细胞超薄制片机进行程序化处理，制成直径2 cm的细胞薄层，接着用95乙醇固定，经巴氏染色法染色后晾干、封片，最后进行经显微镜镜检，诊断和分类标准按照阴道细胞学的分类及报告细则(TBS)诊断。主要步骤如下：常规3μm连续切片、脱蜡、水化，枸橼酸盐缓冲液高温、高压抗原修复，3%H2O2隔断内源性过氧化物酶，滴入一抗，冰箱过夜4℃，滴入聚合物增强剂，室温下孵育20天，室，滴入酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30天，苏木精复染、DAB显色、封片。一抗作阴性对照用磷酸盐缓冲液取代，阳性对照已知阳性切片。光镜高倍镜下计数细胞阳性率，表达端粒酶阳性细胞呈棕黄色颗粒，超过5%为阳性，小于5%为阴性。
1.4统计学处理
以P<0.05为差异有显著性，应用SPSS19.0统计软件进行统计分析，组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1不同病理类型
端粒酶检测阳性率均随CIN病理类型分级的增高而呈上升趋势相比，差异有统计学意义(P<0.05)。端粒酶检测CIN的阳性率高于慢性宫颈炎组织端粒酶阳性率，差异有统计学意义(P<0.05)，HPV—DNA与端粒酶检测CIN的阳性率分别为91.6%，均高于TCT的64.6%，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步提高检测CIN的灵敏度和阴性预测值，3项指标联合测试，但特异度明显下降(P<0.05)。
3 讨论
宫颈癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，发展一般过程为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ从而发展到原位癌甚至浸润性癌。综上，通过TCT、HPV—DNA及端粒酶的联合检测对宫颈癌前期病变患者的早期诊断及病情转归具有一定的临床意义。SA联合检测可对放化疗患者感染疗效的检测和预后评估做出准确的判断；可能是由于体内特殊的免疫机制抑制了CRP的合成，少数其他原发疾病为非感染性疾病者合并感染。原因尚有待进一步分析。尽管SAA的敏感性均优于其他三个指标，然而在127例SAA和CRP结果不一致的病例中仍然出现有9例CRP增高。而SAA正常的情况，所占比例仅为7.09%(9/127)。对疾病类型进行分析时发现，其中3例恶性肿瘤并发感染者虽然SAA正常，但NEU、WBC、和CRP均升高；1例葡萄球菌性烫伤皮肤综合征患儿和1例多发性脑梗合并肺炎者虽然WBC、NEU和SAA均正常，但CRP却呈高水平表达；以上患者均说明，仅靠SAA一个指标来诊断感染是否发生也是不够严谨的，仍然应该结合WBC、NEU和CRP来联合检测，防止漏诊。另外3例恶性肿瘤患者，在某种程度上可以说明在临床判断恶性肿瘤患者是否合并感染时，SAA较CRP的特异性更高WBC均为正常或减低，虽然NEU、CRP均较高但经病原学检查证实无感染，患者未使用抗菌药物治疗而仅进行营养支撑对症治疗后即明显好转。由此可见在临床判断感染是否发生时SAA可以弥补其他三个指标的缺陷，其他三个指标同样也可以作为SAA阴性时感染存在的补充诊断证据。临床上对于感染性疾病的快速诊断指标的选择应该多项目参考，个项目中任何一项均应结合临床认真做出判，断取长补短，减少抗菌药物的滥用，防误诊或止漏诊[4]。
参考文献：
[1]孙怀美.端粒酶活性及高危型人乳头瘤病毒负荷量在不同宫颈病变中的临床意义[D].青岛大学，2012.
[2]孙怀美，吕智敏，王翔宇，等.高危型HPV负荷量和端粒酶活性表达与宫颈病变意义[J].齐鲁医学杂志，2012，27(5)：407-409.
[3]范翠芳，欧阳耀灵.端粒酶活性、HPV 16/18感染及致癌基因与宫颈癌的关系[J].中国妇幼保健，2006，21(21)：2989-2991.
[4]杨丽娟.HPV多重感染、HPV16 E6/E7变异在宫颈癌发生发展中的作用[D].昆明医科大学，2016., 百拇医药(赵冰英 胡红彦 张丽丽)
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