《中华心血管病杂志》：CD137信号影响小鼠VSMC中NFATc1表达
江苏大学附属医院心内科的一项研究表明，CD137信号通过核因子-κB(NF-κB)p65影响小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。该研究发表在2015年第7期《中华心血管病杂志》上。
该 研 究 的 目 的 是 探 讨CD137信号是否通过NF-κB调控小鼠VSMC活化NFATc1的表达。研究采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养。以每孔2×10 5 个VSMC接种于6孔板中培养，待其贴壁后，饥饿24h，用含10%FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α，终浓度10ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48h后，收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测，选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验。细胞实验分为3组，即对照组【含10%FBS、TNF-α(终浓度10ng/ml)、DMEM培养基共同干预】、刺激组【对照组干预基础上加CD137mAb激动剂(终浓度10μg/ml)】和抑制组【对照组干预基础上加PDTC(终浓度30μmol/L)，然后加CD137mAb激动剂(终浓度10μg/ml)】。加入不同干预因素后继续培养，分别于90min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κBp65、核因子κB抑制蛋白(IκB-α)，24h时收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检。逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平。流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平。蛋
白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平。
结果显示，TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果，TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48h后，细胞CD137 mRNA表达均上调。RT-PCR结果示，以24h组CD137 mRNA升高最为显著，以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测亦显示24h组CD137膜蛋白升高最为显著。各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果：刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)，而IκB-α蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(P<0.05)，而IκB-α蛋白表达水平则高于刺激组(P<0.05)。刺激组VMSC细胞核内p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)，而抑制组表达水平则低于刺激组(P<0.05)。各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表 达 水 平 的 检 测 结 果 ， 干预24h后，刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)，N F A T c 1 蛋 白 表 达 水 平 亦高于对照组(P<0.05)。而抑制组VSMC中NFATc1mRNA表达水平低于刺激组
(P<0.05)，蛋白表达水平亦低于刺激组(P<0.05)。
《医学科学报》 (第39期 第6版 国内期刊), 百拇医药
该 研 究 的 目 的 是 探 讨CD137信号是否通过NF-κB调控小鼠VSMC活化NFATc1的表达。研究采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养。以每孔2×10 5 个VSMC接种于6孔板中培养，待其贴壁后，饥饿24h，用含10%FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α，终浓度10ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48h后，收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测，选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验。细胞实验分为3组，即对照组【含10%FBS、TNF-α(终浓度10ng/ml)、DMEM培养基共同干预】、刺激组【对照组干预基础上加CD137mAb激动剂(终浓度10μg/ml)】和抑制组【对照组干预基础上加PDTC(终浓度30μmol/L)，然后加CD137mAb激动剂(终浓度10μg/ml)】。加入不同干预因素后继续培养，分别于90min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κBp65、核因子κB抑制蛋白(IκB-α)，24h时收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检。逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平。流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平。蛋
白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平。
结果显示，TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果，TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48h后，细胞CD137 mRNA表达均上调。RT-PCR结果示，以24h组CD137 mRNA升高最为显著，以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测亦显示24h组CD137膜蛋白升高最为显著。各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果：刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)，而IκB-α蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(P<0.05)，而IκB-α蛋白表达水平则高于刺激组(P<0.05)。刺激组VMSC细胞核内p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)，而抑制组表达水平则低于刺激组(P<0.05)。各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表 达 水 平 的 检 测 结 果 ， 干预24h后，刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)，N F A T c 1 蛋 白 表 达 水 平 亦高于对照组(P<0.05)。而抑制组VSMC中NFATc1mRNA表达水平低于刺激组
(P<0.05)，蛋白表达水平亦低于刺激组(P<0.05)。
《医学科学报》 (第39期 第6版 国内期刊), 百拇医药