重组葡萄球菌株诱生白喉抗毒素
叶巍；熊思东
2002-01-22 08:50:46
以非致病性菌株表达目的的抗原，可望诱导有效的免疫应答，其中以革兰阳性的木糖葡萄球菌、肉质葡萄球菌尢为安全、高效。它们与金黄色葡萄球菌有低水平的DNA同源性，但却不产生有致病力的毒素、溶血素、凝集素、蛋白A等，可作为抗原的活载体，有效表达全部或部分抗原成分，诱导持久的体液免疫反应。本实验旨在研究毒性蛋白上某一定义完全的结构域能否被表达在这两种蓖株表面，它们能否在小鼠体内诱生中和抗体。已知，白喉毒素(DT)的382～535氨基酸片段是结构完整的葡萄，为受体结合域DTR。融合有DTR的可溶性蛋白能消除DT对Vero细胞的毒性，能在动物体内诱生中和抗体。作者把编码DTR的核苷酸序列插到2个质粒pSE'mp18ABPXM和pSPPmABPXM中，将上述质粒分别转染到木糖葡萄球菌和肉质葡萄球蓖中，即构建了2个含有异种蛋白的表达系统pSE'DTR和pSPPDTR。用Western印迹分析细菌溶解产物，证实两种重组菌株都能合成17×103的DTR，并有效地表达于肉质葡萄球菌表面，但却不表达于木糖葡萄球菌表面。
其原因可能为：①肉质葡萄球菌的表达系统(pSPPDTR)比木糖葡萄球菌的表达系统(pSE'DTR)能更有效地将异种蛋白转移到菌体表面；②木糖葡萄球菌表面具有分解异种蛋白活性的蛋白酶，而肉质葡萄球菌则缺乏这种酶；③两个表达系统中DTR N端结合的片段不同，肉质葡萄球菌的是一段来自酶209个氨基酸残基的的前肽，而在木糖葡萄球菌的则是源于金黄色葡萄球菌蛋白A10个氨基酸残基的前肽，这一差别可能影响了DTR的白叠、降解等。将重组肉质葡萄球菌加完全福氏佐剂给BALB/c小鼠腹腔内注射后采血，测得抗DT抗体的效价明显升高，且这一抗血清具有消除DT对Vero细胞毒性的作用，表明肉质葡萄球菌作为活载体，能有效地将异种蛋白上一段结构完整的葡萄呈递给机体免疫系统，诱生体液免疫。至于如何加强重组菌株的免疫原性及将其应用到异种免疫等方面需进一步研究。/《国外医学微生物学分册》, 百拇医药
2002-01-22 08:50:46
以非致病性菌株表达目的的抗原，可望诱导有效的免疫应答，其中以革兰阳性的木糖葡萄球菌、肉质葡萄球菌尢为安全、高效。它们与金黄色葡萄球菌有低水平的DNA同源性，但却不产生有致病力的毒素、溶血素、凝集素、蛋白A等，可作为抗原的活载体，有效表达全部或部分抗原成分，诱导持久的体液免疫反应。本实验旨在研究毒性蛋白上某一定义完全的结构域能否被表达在这两种蓖株表面，它们能否在小鼠体内诱生中和抗体。已知，白喉毒素(DT)的382～535氨基酸片段是结构完整的葡萄，为受体结合域DTR。融合有DTR的可溶性蛋白能消除DT对Vero细胞的毒性，能在动物体内诱生中和抗体。作者把编码DTR的核苷酸序列插到2个质粒pSE'mp18ABPXM和pSPPmABPXM中，将上述质粒分别转染到木糖葡萄球菌和肉质葡萄球蓖中，即构建了2个含有异种蛋白的表达系统pSE'DTR和pSPPDTR。用Western印迹分析细菌溶解产物，证实两种重组菌株都能合成17×103的DTR，并有效地表达于肉质葡萄球菌表面，但却不表达于木糖葡萄球菌表面。
其原因可能为：①肉质葡萄球菌的表达系统(pSPPDTR)比木糖葡萄球菌的表达系统(pSE'DTR)能更有效地将异种蛋白转移到菌体表面；②木糖葡萄球菌表面具有分解异种蛋白活性的蛋白酶，而肉质葡萄球菌则缺乏这种酶；③两个表达系统中DTR N端结合的片段不同，肉质葡萄球菌的是一段来自酶209个氨基酸残基的的前肽，而在木糖葡萄球菌的则是源于金黄色葡萄球菌蛋白A10个氨基酸残基的前肽，这一差别可能影响了DTR的白叠、降解等。将重组肉质葡萄球菌加完全福氏佐剂给BALB/c小鼠腹腔内注射后采血，测得抗DT抗体的效价明显升高，且这一抗血清具有消除DT对Vero细胞毒性的作用，表明肉质葡萄球菌作为活载体，能有效地将异种蛋白上一段结构完整的葡萄呈递给机体免疫系统，诱生体液免疫。至于如何加强重组菌株的免疫原性及将其应用到异种免疫等方面需进一步研究。/《国外医学微生物学分册》, 百拇医药