30例性发育异常患者的 SRY基因研究

    张晓珍 , 饶兆英 , 周红平 , 霍晓春 , 钟立群 (江西省儿童医院遗传室 , 330006)

    摘 要: 目的 对 30例性发育异常患者进行分子遗传学检查以探讨性别异常的原因。方法 用实时荧光定量聚合酶链

    反应 ( fluorescence quantitative poiymerace chain reacti on, FQ - PCR) 的方法检测 SRY基因。结果 11例 46, XY男性尿道下

    裂 , SRY ( + ) ; 2例 46, XY睾丸女性化综合症 , SRY ( + ) ; 8例 46, XX女性假两性畸形 , SRY ( - ) ; 3例 46, XX两性

    畸形 , SRY ( + ) ; 1例 46, XY尿道下裂 , SRY ( - ) ; 1例 46, XX阴蒂肥大 , SRY ( + ) ; 1例 46, XY阴蒂肥大 , SRY

    ( + ) ; 2例 45, X/46, XY男性 , 其中 1例 SRY ( + ) , 1例 SRY ( - ) ; 1例 46, XX/46, XY男性 , SRY ( + )。结论

    性分化异常患者进行 SRY基因检测对诊断和治疗及探讨其发病机制具有十分重要意义。

    关键词: 实时荧光定量聚合酶链反应 性发育异常 SRY基因

    中图分类号: R34917 文献标识码: A 文章编号: 1006 - 9534 (2006) 06 - 0016 - 02

    性发育异常是医学遗传研究的重要内容之一, 1990年

    sinclair

    [1 ]

    等从人类 Y染色体上分离出性别决定基因 ( sex -

    detemining regi on of the Y, SRY)后,关于 SRY基因与性分化异

    常越来越受到重视。很多实验证实, SRY基因是人类 Y染色

    体上睾丸决定因子 ( testis - determining fat or, T DF)的最佳侯选

    基因。我们对 30例性发育异常患者进行细胞遗传学检查分

    析,并运用实时荧光定量 PCR方法进行 SRY基因检测,从分

    子水平揭示性分化异常的原因,为临床提供明确的诊断数据。

    资料与方法

    1 . 病历资料 30例患者均来自我室遗传咨询门诊或住

    院病人 ,因外生殖器畸形 ,睾丸发育不良 ,第二性特征异常等

    而作遗传学检查者。

    2 . 方法

    (1) 细胞遗传学:采用细胞培养常规制片 , G显带 ,按照

    国际细胞遗传学命名体制 ( ISCN)法进行核型分析。

    (2) 分子遗传学:取抗凝血 1ml, 用灭菌双蒸水破裂红

    细胞 ,分离出的白细胞经蛋白酶 K消化和常规酚 /氯仿法提

    取基因组 DNA,并用 TE (pH8 . 0)溶解后存储于 - 20℃冰箱

    备用。

    实时 FQ - PCR: 采用 L ine - Gene FQD33A荧光定量

    PCR仪 ,使用 Y染色体上的 SRY位点进行检测 ,片段大小为

    139bp,引物为 F: 5’- CG A AGA T GCCGAAG AAT - 3’ , R: 5’-

    GGCGGT AAGTGGCCT AGCT - 3 ’ . 探 针 为 5 ’ - ( FAM )

    CAGTTTCCCGCAGATCCCG( T AMRA) - 3’ . FQ - PCR试剂盒

    由中山大学达安公司提供。

    FQ - PCR的循环条件: 93℃ 5min,然后 93℃ 1min, 55℃

    1min,共 40个循环。

    使用已知浓度的男性 SRY基因组 DNA作为标准稀释曲

    线 (见图 1) ,患者扩增出 SRY基因为阳性 , (见图 2)。

    图 1 SRY基因 DNA标准释释曲线 图 2 患者 SRY基因阳性曲线

    由低到高分别为 10

    4

    10

    5

    10

    6

    10

    7

    结 果

    11例 46,XY男性尿道下裂, SRY( + ) ; 2例 46,XY睾丸

    女性化综合症, SRY( + ) ; 8例 46, XX女性假两性畸形, SRY

    ( - ) ; 1例 46, XX阴蒂肥大, SRY( + ) ; 3例 46, XX尿道下

    裂, SRY( + ) ; 1例 46, XY尿道下裂, SRY( - ) ; 1例 46, XY

    阴蒂肥大, SRY( + ) ; 2例 45, X/46, XY男性 其中 1例 SRY

    ( + ) , 1例 SRY( - ) ; 1例 46,XX/46,XY男性 SRY( + ) ......