生化检验.pdf
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参见附件(2787kb)。
蛋白质测定
文件编号：JY-SHH-001
实施时间：2005.05.21
文件版本：SOP ver 1.0
■■■■■人民医院
检验科生化实验室
总蛋白
(TP)SOP文件 页码：共 5 页，第 1 页
1. 原理：
1.1 方法学：双缩脲终点比色法。
1.2 方法原理：蛋白质(Protein)分子中的肽键(-CONH-) ，在碱性(Alkali)溶液中能与二价铜
离子形成紫色络合物，其色泽的深浅与蛋白质浓度成正比。贝克曼 SYNCHRON CX9 PRO 生化仪
会自动的将适量的试剂及样本加入反应管(cuvette)中。机器会自动侦测 560 nm 波长处吸光度的改
变，吸光度的改变直接与总蛋白质的浓度成正比。
1.3 反应方程式：
Alkali
Protein + Cu++
―――→ Protein-Copper Complex(紫色络合物)
2. 样本：
2.1 病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。坐位与卧位、睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。
2.2 样本种类：生物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。
新鲜的、刚被抽出的血清或血浆样本是最佳的选择。如果用血浆作样本，可以使用肝素、EDTA 作抗
凝剂。本法也可测定浆膜腔积液中的总蛋白，全血、尿液与脑脊髓液是不被推荐的样本。
2.3 样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过
1min， 穿刺成功后立即松开止血带。 采血前 24 小时禁食高脂。 (详见本科制定的静脉采血 SOP文件)
2.4 样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求封密、无溶血、无杂物) 、所用试管是否
正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
2.5 样本保存：
2.5.1 采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。血清或血浆应该立即被分离，防止溶血，避免接触
到血球部分。从采血到上机的最长时间限制是 2 小时。
2.5.2 分离的血清或血浆在 15℃～30℃的环境下不应该保存超过 8小时。假如测试无法在 8小时内
完成时，血清或血浆应该被保存在 2℃～8℃的环境中；假如测试无法在 48 小时内完成，或分离的
样本无法储存超过 48小时，样本应该冰冻在零下 15℃～20℃的环境中。冰冻的样本只能解冻一次，有时分析物产生降低或恶化的情形多半是因为重复冰冻及解冻的原因所造成。
2.6 样本准备：
2.6.1 血清或血浆样本可直接使用。
2.6.2 浆膜腔积液样本如浑浊或有凝块出现，需离心后使用。
检验科SOP文件·生化实验室·项目测试 ―1― 蛋白质测定
文件编号：JY-SHH-001
实施时间：2005.05.21
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2.7 样本容量：0.5mL 的样本杯和原试管是最合适的选择。
3. 试剂：
3.1 厂商：浙江东瓯生物技术有限公司。
3.2 包装：贝克曼 CX 专用。每盒三个总蛋白试剂，共 1170 test。
3.3 成份：见下表。
成份 浓度 成份 浓度
酒石酸钾钠 32 mmol/L 硫酸铜 12 mmol/L
碘化钾 30 mmol/L 氢氧化钠 0.6 mol/L
3.4 基本参数：
主波长 546 nm 样本 5 ul 反应方法 终点法
次波长 660 nm R1 300 ul 反应时间 10 min
试验温度 37 ℃
3.5 试剂准备：无须准备，直接使用。
3.6 试剂储存：
3.6.1 试剂在未曾打开的情况下，储存在 2℃～26℃时，可一直稳定到试剂标签所示的有效日期。
3.6.2试剂开封后在 2～8℃的情况下，试剂上机的稳定时间为 20天，除非已经过了试剂标签所示的
有效日期。
3.6.3总蛋白质试剂请勿冰冻!
4. 适用仪器：
适用于本室 BECKMAN COULTER SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪。
5. 校正：
5.1 校正液：试剂盒内附标准液，无须另外购买。
5.2 校正液准备：无需准备，直接使用。
5.3 校正液储存： 2～8℃闭光保存可稳定至瓶签所示日期； 打开后 2～8℃密闭闭光保存可稳定十天。
5.4 校正须知：
5.4.1 在 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪计算机的内存中，保存着校正因子。
5.4.2 在正常操作的情形下，每 7 天需要校正一次。此外每当更换新的试剂及作任何维修、保养动
作之后，均需用校正液进行校正。
检验科SOP文件·生化实验室·项目测试 ―2― 蛋白质测定
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实施时间：2005.05.21
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5.4.3 欲查询更多有关校正的步骤，请参考操作手册。
5.4.4 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪在校正完毕之后， 会自动换算出校正报告，假若出现校正失败的情形时，屏幕会显示错误的讯息，并且系统会自动改变成“校正失败”的状态。
查阅错误讯息，见操作手册的附录 G。
6. 质控：
6.1 质控血清：郎道非定值质控血清(中、高值两个浓度水平) ；5ml×20/每盒。
6.2 质控血清准备：每瓶加蒸馏水 5ml，完全复溶后分装于 1ml 带盖离心管中，放置-20℃冰箱保
存，可稳定数月。使用前从冰箱取出两个浓度的质控血清各一支，放置室温待完全溶化后摇匀使用。
6.3 使用频率：每天必须随样本做两个浓度水平的质控测试。此外每当校正、更换新的试剂及作任
何保养动作之后，均需作质控液的测试。
7. 测试步骤：
6.1 将试剂放置在试剂槽内。
6.2 完成放置试剂之后，需要执行校正的动作。
6.3 将样本及质控血清待测的项目键入计算机内。
6.4 放置样本及质控血清于样本转盘，之后您将得到试验结果。
8. 计算：
8.1 计算公式： x
s
s
A
TPg/L C
A
× ()=
x
s
s
C
A
A
：表示测定管反应吸光度-测定管空白吸光度；
：表示标准管反应吸光度-标准管空白吸光度； 表示标准液浓度。
8.2 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪分析后会及时的计算结果。如果操作者当初
键入稀释倍数，您得到的结果便是稀释后的结果。
9. 参考范围：
9.1 建议：各实验室应根据病人族群建立自己的参考值区间。
9.2 血清、血浆：60.0 ～80.0 g/L。
9.3 浆膜腔积液：<25.0 g/L，与血清总蛋白比值<0.5。
10. 注意事项：
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文件版本：SOP ver 1.0
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1. 原理：
1.1 方法学：双缩脲终点比色法。
1.2 方法原理：蛋白质(Protein)分子中的肽键(-CONH-) ，在碱性(Alkali)溶液中能与二价铜
离子形成紫色络合物，其色泽的深浅与蛋白质浓度成正比。贝克曼 SYNCHRON CX9 PRO 生化仪
会自动的将适量的试剂及样本加入反应管(cuvette)中。机器会自动侦测 560 nm 波长处吸光度的改
变，吸光度的改变直接与总蛋白质的浓度成正比。
1.3 反应方程式：
Alkali
Protein + Cu++
―――→ Protein-Copper Complex(紫色络合物)
2. 样本：
2.1 病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。坐位与卧位、睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。
2.2 样本种类：生物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。
新鲜的、刚被抽出的血清或血浆样本是最佳的选择。如果用血浆作样本，可以使用肝素、EDTA 作抗
凝剂。本法也可测定浆膜腔积液中的总蛋白，全血、尿液与脑脊髓液是不被推荐的样本。
2.3 样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过
1min， 穿刺成功后立即松开止血带。 采血前 24 小时禁食高脂。 (详见本科制定的静脉采血 SOP文件)
2.4 样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求封密、无溶血、无杂物) 、所用试管是否
正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
2.5 样本保存：
2.5.1 采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。血清或血浆应该立即被分离，防止溶血，避免接触
到血球部分。从采血到上机的最长时间限制是 2 小时。
2.5.2 分离的血清或血浆在 15℃～30℃的环境下不应该保存超过 8小时。假如测试无法在 8小时内
完成时，血清或血浆应该被保存在 2℃～8℃的环境中；假如测试无法在 48 小时内完成，或分离的
样本无法储存超过 48小时，样本应该冰冻在零下 15℃～20℃的环境中。冰冻的样本只能解冻一次，有时分析物产生降低或恶化的情形多半是因为重复冰冻及解冻的原因所造成。
2.6 样本准备：
2.6.1 血清或血浆样本可直接使用。
2.6.2 浆膜腔积液样本如浑浊或有凝块出现，需离心后使用。
检验科SOP文件·生化实验室·项目测试 ―1― 蛋白质测定
文件编号：JY-SHH-001
实施时间：2005.05.21
文件版本：SOP ver 1.0
■■■■■人民医院
检验科生化实验室
总蛋白
(TP)SOP文件 页码：共 5 页，第 2 页
2.7 样本容量：0.5mL 的样本杯和原试管是最合适的选择。
3. 试剂：
3.1 厂商：浙江东瓯生物技术有限公司。
3.2 包装：贝克曼 CX 专用。每盒三个总蛋白试剂，共 1170 test。
3.3 成份：见下表。
成份 浓度 成份 浓度
酒石酸钾钠 32 mmol/L 硫酸铜 12 mmol/L
碘化钾 30 mmol/L 氢氧化钠 0.6 mol/L
3.4 基本参数：
主波长 546 nm 样本 5 ul 反应方法 终点法
次波长 660 nm R1 300 ul 反应时间 10 min
试验温度 37 ℃
3.5 试剂准备：无须准备，直接使用。
3.6 试剂储存：
3.6.1 试剂在未曾打开的情况下，储存在 2℃～26℃时，可一直稳定到试剂标签所示的有效日期。
3.6.2试剂开封后在 2～8℃的情况下，试剂上机的稳定时间为 20天，除非已经过了试剂标签所示的
有效日期。
3.6.3总蛋白质试剂请勿冰冻!
4. 适用仪器：
适用于本室 BECKMAN COULTER SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪。
5. 校正：
5.1 校正液：试剂盒内附标准液，无须另外购买。
5.2 校正液准备：无需准备，直接使用。
5.3 校正液储存： 2～8℃闭光保存可稳定至瓶签所示日期； 打开后 2～8℃密闭闭光保存可稳定十天。
5.4 校正须知：
5.4.1 在 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪计算机的内存中，保存着校正因子。
5.4.2 在正常操作的情形下，每 7 天需要校正一次。此外每当更换新的试剂及作任何维修、保养动
作之后，均需用校正液进行校正。
检验科SOP文件·生化实验室·项目测试 ―2― 蛋白质测定
文件编号：JY-SHH-001
实施时间：2005.05.21
文件版本：SOP ver 1.0
■■■■■人民医院
检验科生化实验室
总蛋白
(TP)SOP文件 页码：共 5 页，第 3 页
5.4.3 欲查询更多有关校正的步骤，请参考操作手册。
5.4.4 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪在校正完毕之后， 会自动换算出校正报告，假若出现校正失败的情形时，屏幕会显示错误的讯息，并且系统会自动改变成“校正失败”的状态。
查阅错误讯息，见操作手册的附录 G。
6. 质控：
6.1 质控血清：郎道非定值质控血清(中、高值两个浓度水平) ；5ml×20/每盒。
6.2 质控血清准备：每瓶加蒸馏水 5ml，完全复溶后分装于 1ml 带盖离心管中，放置-20℃冰箱保
存，可稳定数月。使用前从冰箱取出两个浓度的质控血清各一支，放置室温待完全溶化后摇匀使用。
6.3 使用频率：每天必须随样本做两个浓度水平的质控测试。此外每当校正、更换新的试剂及作任
何保养动作之后，均需作质控液的测试。
7. 测试步骤：
6.1 将试剂放置在试剂槽内。
6.2 完成放置试剂之后，需要执行校正的动作。
6.3 将样本及质控血清待测的项目键入计算机内。
6.4 放置样本及质控血清于样本转盘，之后您将得到试验结果。
8. 计算：
8.1 计算公式： x
s
s
A
TPg/L C
A
× ()=
x
s
s
C
A
A
：表示测定管反应吸光度-测定管空白吸光度；
：表示标准管反应吸光度-标准管空白吸光度； 表示标准液浓度。
8.2 BECKMAN SYNCHRON CX9 PRO全自动生化分析仪分析后会及时的计算结果。如果操作者当初
键入稀释倍数，您得到的结果便是稀释后的结果。
9. 参考范围：
9.1 建议：各实验室应根据病人族群建立自己的参考值区间。
9.2 血清、血浆：60.0 ～80.0 g/L。
9.3 浆膜腔积液：<25.0 g/L，与血清总蛋白比值<0.5。
10. 注意事项：
检验科SOP文件·生化实验室·项目测试 ―3― 蛋白质测定
文件编号：JY-SHH-001
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