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编号:36726
实验性肌炎动物模型的研究.ppt
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    实验性肌炎动物模型的研究

    Experimental autoimmune myositis in rats-clinicopathic and immunologic studies

    谢瑶

    北京中日友好医院

    风湿免疫科

    特发性炎性肌病(IIM)的概述

    > 以肌肉为靶器官的自身免疫性疾病:

    PM、DM、IBM

    > 病因及发病机制尚不清楚

    中心环节:免疫调节和免疫反应的异常

    > 病理学特点:肌纤维变性坏死和再生伴淋巴细胞浸润

    IIM 概 述

    免疫组化特点：

    > PM/IBM:

    ?°CD8/MHC-I 复合物?±损伤

    > DM:

    束周萎缩，B细胞及CD4+T细胞浸润

    EAM研究近况

    > 建立理想的动物模型，是研究IIM的发病机制和治疗最有效地工具之一

    > 目前国内尚无系统研究，国外将自身免疫性肌病的动物模型分为：自发性、诱导型和转基因型三种

    EAM研究近况

    国外：

    国内：

    目前动物模型的优缺点

    > 优点：成功率较高，方法成熟

    > 国内EAM存在的不足：

    ?症状较轻，炎症持续时间较短

    ?无免疫组化分析

    ?抗原性诱导物缺乏进一步分析

    本课题的研究目的

    > 建立实验性炎性肌病动物模型深入研究IIM的发病机理

    > 观察比较激素、蛋白酶体抑制剂在肌炎动物模型的疗效

    实验methods(EAM的建立)

    > 制备异种肌匀浆，采用Bradford方法测定蛋白浓度

    > 设置模型组和对照组，免疫SD大鼠，观察收集资料

    > 检测血清肌酶，肌肉组织病理检查，图像分析

    实验方法( 模型组动物免疫方法)

    实验方法( 对照组动物免疫方法)

    实验方法(动物肌炎检测方法)

    > 肌酶谱的测定：实验前、免疫注射第1、2、3、4、5周后分别采血4-6ml/只，取上清检测肌酶

    > 病理检查：分别于免疫注射后1、2、3、4、5周取大鼠的前肢近端肌肉、前肢后端肌肉、后肢近端屈肌、后肢近端伸肌、后肢远端骨骼肌组织各两条，10%甲醛固定，石蜡包埋，HE染色；新鲜组织同时液氮冻存

    实验方法(肌肉组织免疫组化染色)

    > 骨骼肌组织石蜡切片，常规免疫组化染色，检测炎性细胞表达CD4、CD8、CD20分子的情况

    > 骨骼肌组织冰冻切片，常规免疫组化染色，检测肌细胞膜表达MHC-I分子的情况

    实验方法(EAM的治疗)

    将肌酶升高的大鼠分为

    > 激素治疗组(强的松5mg/d，每日灌胃)

    > 蛋白酶体抑制剂治疗组

    (MG-132 1mg/ml，每周尾静脉注射1ml)

    > 对照组(未作任何治疗)

    治疗1个月后处死

    比较三组间肌酶和肌肉组织免疫病理改变

    实 验 结 果

    实 验 结 果

    结 论

    > 应用兔骨骼肌匀浆、FCA、PT可以成功建立EAM

    > 本研究动物模型与人类PM在肌酶、病理改变上具有相似之处，为人类肌炎的发病及治疗研究提供理论依据

    > MG-132对EAM有一定的治疗作用但疗效不及强的松，MG-132在人类肌炎中的应用有待进一步的研究。