石蜡切片洋葱根尖的制片

http://www.100md.com 2003年8月25日 《黑龙江医药科学》 2000年第1期

     作者：张晓波 郭金东

    单位：张晓波(佳木斯大学基础医学院病解教研室)；郭金东(佳木斯大学基础医学院病解教研室)

    关键词：切片；洋葱根尖

    洋葱根尖组织切片是生物学界观察细胞有丝分裂过程的最佳对象

    洋葱根尖组织切片是生物学界观察细胞有丝分裂过程的最佳对象。以往洋葱根尖组织切片采用登汉氏铁苏木素染色法，用时长；采用非常规染液，苦味酸分化不易掌握，长期保存易褪色等缺点。通过长期的实践和观察，采用HE染色法，对上述不足有了明显的改进。(此法还适用于其他植物的根端分化组织细胞有丝分裂的观察)，现将染色过程介绍如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    标本洋葱根尖；用品及药品：铬醋酸中液、哈瑞氏苏木素、饱和碳酸锂水溶液(2g碳酸锂或稍多一些溶于100ml蒸馏水中性液，呈弱碱性)。

    1.2 操作过程

    固定：切取培养于广口瓶中的洋葱根尖(长约5～8mm)固定在铬醋酸中液；冲洗：流水冲洗24h以上，饱和碳酸锂水溶液浸泡至黄色褪净为止；脱水：由低浓度至高浓度乙醇，每隔半小时更换一次；透明：香柏油透明三次，每次3h；浸蜡与包埋，照一般的方法；切片：切成纵切面，厚度约4～5μm；附贴：选择蜡带中间的蜡片，切面较完整的材料分割成一定大小的蜡带，附贴在载玻片上(根尖纵轴与载玻片的长轴垂直)；染色：常规HE染色，①切片溶蜡并下降至水；②哈瑞氏苏木素染色10min；③洗去多余的染料。④1%盐酸酒精分化1min；⑤自来水蓝化，显微镜下观察直至细胞内的染色体、核仁等部分均能分辨清楚为止；⑥0.1%水溶性曙红淡染；⑦脱水(从低浓度至高浓度乙醇)；⑧二甲苯透明；⑨封藏。

    2 结果与讨论

    细胞内染色体、核仁呈兰色，胞质呈淡粉色。本染色的主要特点是采用苏木精对染色体着色，镜下结构清晰易观察，切片保存时间长，不易褪色，同时在分化中采用1%盐酸酒精替代苦味酸分化避免了分化时间及分化程度不易掌握的缺点，透明采用香柏油替代二甲苯可减少组织收缩，降低镜下观察组织的失真性。因此，我们认为，石蜡切片洋葱根尖的制片是现今最佳的染色方法。

    (收稿：1999-09-19), http://www.100md.com

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