将3×106 个AAV-293 细胞接种到培养皿中，并加入10 ml含10% 胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃含5% 二氧化碳的培养箱中培养。当细胞融合达到70% ～ 80% 时，用提取的含GJB1基因的AAV质粒载体同 pHelper、pAAV-RC共转染进 AAV-293细胞，培养72 h后收集带有GJB1基因的AAV。

    3. AAV 病毒的浓缩及纯化

    收集成功转染的细胞与其培养基一同高速离心，去除上清液后用 1 ml PBS重悬细胞。重悬后的细胞在干冰乙醇浴和37℃水浴中反复冻融4次。凍融结束后以9708转/分离心，并将上清液转移至新离心管中。加入40% 的聚乙二醇8000后于冰上放置 2 h，以4854转/分离心 30 min并去除上清液。用PBS重悬沉淀物。以5317转/分离心 30 min后将上清液移至新的EP管中。加入Benzonase 核酸酶37℃ 孵育 30 min。过滤后往滤液中添加氯化铯(CsCl)直到密度为1.41 g/ml(折射率为1.372)并振荡使之充分溶解。将样品置于超速离心管中以41 200转/分离心24 h，形成密度梯度。收集不同密度的样品并进行滴度测定 ......