巴戟天低聚糖对Aβ2535致拟痴呆模型大鼠的保护作用(1)
[摘要] 目的：观察巴戟天低聚糖(oligosaccharides of Morinda officinalis， OMO)对Aβ2535致SD大鼠拟痴呆模型的影响，阐明其治疗痴呆症的药效机制。方法：采用SD大鼠双侧海马区注射Aβ2535各10 μg制备拟痴呆模型，实验设置空白对照组、假手术组、模型组、阳性药安理申组(0.125 mg·kg-1·d-1)、OMO高、低剂量组(60，20 mg·kg-1·d-1)。手术后15 d开始连续给药25 d后，采用试剂盒酶标仪法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GSHPx)、乙酰胆碱(ACh)、乙酰胆碱酯酶(AChE)以及Na+/K+ATPase等水平。结果：与模型组比较，各给药组大脑组织中SOD，CAT，GSHPx活力增加，MDA含量降低(P<0.01)；各给药组乙酰胆碱水平升高，乙酰胆碱酯酶水平降低和脑能量代谢水平Na+/K+ATPase活性升高。结论：OMO通过提高抗氧化能力、激活脑能量代谢、改善胆碱能系统损伤等作用以改善Aβ2535致大鼠痴呆症状。
, 百拇医药
[关键词] 巴戟天低聚糖；痴呆；药效学；作用机制；氧化应激；能量代谢
[稿件编号] 20121011022
[基金项目] 海南省重点科技计划项目(090603)
[通信作者] *林励，研究员，博士生导师，Tel：(020)39358270， Email： ll76611@yahoo.com.cn
[作者简介] 陈地灵，博士后，Email：diling0828@sina.com
巴戟天为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥肉质根。味甘、辛，性微温，有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。主要分布在福建、广东、广西、海南等省的热带和亚热带地区，是我国著名的“四大南药”之一。巴戟天中主要含有糖类、蒽醌、氨基酸、脂类、有机酸等化合物及无机元素[1]。其中，低聚糖类物质含量较高，成分复杂，药理作用明显[27]，具有十分广阔的开发应用前景。为阐明其抗痴呆药效学，本研究以Aβ损伤SD大鼠为模型，采用试剂盒酶标仪法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GSHPx)等氧化指标，以及乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)以及Na+/K+ATPase等含量。考察OMO对Aβ2535致拟痴呆模型大鼠的影响，以期为阐明其抗痴呆药效提供研究基础。
, 百拇医药
1 材料
1.1 仪器 桌面型数字式双臂大鼠脑立体定位仪(瑞沃德生命科技有限公司)；Thermo D37520型高速冷冻离心机(德国Heraeus公司)；Phs25型pH计(上海精密科学仪器有限公司)；GenPure超纯水系统(德国TKA公司)；KQ500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BP211D电子天平(d=0.01 mg，德国Sartorious)；水浴箱；微量移液器；酶标仪(瑞沃德生命科技有限公司)；佳美SK1快速混匀器(江苏金坛市佳美仪器厂)。
1.2 试药 巴戟天低聚糖(OMO， 自制，经鉴定其纯度>95%)加蒸馏水配成40 g·L-1，备用。阳性药盐酸多奈哌齐片研碎用前蒸馏水配置成混悬液0.125 g·L-1，备用。Aβ2535(Sigma公司)，取Aβ25～35用无菌生理盐水配制成2 g·L-1，-20 ℃保存。聚集态的Aβ2535形成：Aβ2535溶液在37 ℃保温箱中放置7 d，使其变为聚集态的Aβ。SOD，MDA，CAT和GSHPx等氧化指标，以及ACh，AChE和Na+/K+ATPase等测试试剂盒购买于南京建成生物有限公司；其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.3 动物 SD大鼠，SPF级，3月龄，84只，雄性，体重180～220 g，饲养环境SPF级，广州中医药大学实验动物中心，动物质量合格证号SCXK(粤)20080020，动物使用许可证号SYXK(粤)20080085。
2 方法
2.1 动物分组及造模、给药方案 SD大鼠适用性饲养3 d后随机分成6组，空白对照组、假手术组、模型组、阳性药安理申组(0.125 mg·kg-1)、巴戟天低聚糖高、低剂量组(60，20 mg·kg-1)，平均每组14只。大鼠用30 g·L-1的戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉后，头顶部去毛，消毒皮肤并切开，在颅骨上用牙钻对称打2个孔(AP -3.6 mm，ML±2.5 mm，DV 3.0 mm)即为海马区注射点。每侧注射5 μL(10 μg)聚集态的Aβ2535，在5 min内注完，并留针5 min。用骨蜡填补针孔，缝合皮肤并肌肉注射青霉素。空白组不做手术处理，假手术组(用以排除手术本身的影响)在海马内注射等量的生理盐水。大鼠手术后单笼饲养至完全清醒，再同组合并。造模后第15 天开始给药。
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2.2 OMO对模型大鼠体重和脏器指数的影响 每天观察动物的外观体态(毛、色、形)和动态并作相应记录，每隔2 d测量动物体重1次，行为学检测后，处死动物，取脑、肾、脾脏、睾丸等进行相关指标检测。脏器系数=脏器质量/体重×100%。
2.3 OMO对模型大鼠氧化应激、能量代谢及胆碱能系统的影响 称取大鼠左半脑组织加9倍生理盐水制成10%匀浆，3 500×g离心10 min，取上清液，依次测定总蛋白，SOD，MDA，GSHPx，CAT，Na+/K+ATPase，ACh，AChE等指标。
2.4 统计学处理 实验数据用SPSS 16.0统计软件进行各实验组间的比较，用Dunnett′s检验进行各试验组与对照组比较。
3 结果
3.1 OMO对模型大鼠体重及脏器系数的影响 给药期间，模型组及高剂量组各有1只动物死亡，其表现为大便干燥，肚子肿大，消瘦。各给药组毛色比模型组明显光滑，未见其他异常情况。体重检测结果显示，各组动物体重差异没有显著性，提示造模和给予不同药物和不同剂量，对动物体重影响不大。对大鼠脏器系数的影响结果见表1。, 百拇医药(陈地灵，张鹏，林励，张鹤鸣，刘颂豪)
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[关键词] 巴戟天低聚糖；痴呆；药效学；作用机制；氧化应激；能量代谢
[稿件编号] 20121011022
[基金项目] 海南省重点科技计划项目(090603)
[通信作者] *林励，研究员，博士生导师，Tel：(020)39358270， Email： ll76611@yahoo.com.cn
[作者简介] 陈地灵，博士后，Email：diling0828@sina.com
巴戟天为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥肉质根。味甘、辛，性微温，有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。主要分布在福建、广东、广西、海南等省的热带和亚热带地区，是我国著名的“四大南药”之一。巴戟天中主要含有糖类、蒽醌、氨基酸、脂类、有机酸等化合物及无机元素[1]。其中，低聚糖类物质含量较高，成分复杂，药理作用明显[27]，具有十分广阔的开发应用前景。为阐明其抗痴呆药效学，本研究以Aβ损伤SD大鼠为模型，采用试剂盒酶标仪法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GSHPx)等氧化指标，以及乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)以及Na+/K+ATPase等含量。考察OMO对Aβ2535致拟痴呆模型大鼠的影响，以期为阐明其抗痴呆药效提供研究基础。
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1 材料
1.1 仪器 桌面型数字式双臂大鼠脑立体定位仪(瑞沃德生命科技有限公司)；Thermo D37520型高速冷冻离心机(德国Heraeus公司)；Phs25型pH计(上海精密科学仪器有限公司)；GenPure超纯水系统(德国TKA公司)；KQ500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BP211D电子天平(d=0.01 mg，德国Sartorious)；水浴箱；微量移液器；酶标仪(瑞沃德生命科技有限公司)；佳美SK1快速混匀器(江苏金坛市佳美仪器厂)。
1.2 试药 巴戟天低聚糖(OMO， 自制，经鉴定其纯度>95%)加蒸馏水配成40 g·L-1，备用。阳性药盐酸多奈哌齐片研碎用前蒸馏水配置成混悬液0.125 g·L-1，备用。Aβ2535(Sigma公司)，取Aβ25～35用无菌生理盐水配制成2 g·L-1，-20 ℃保存。聚集态的Aβ2535形成：Aβ2535溶液在37 ℃保温箱中放置7 d，使其变为聚集态的Aβ。SOD，MDA，CAT和GSHPx等氧化指标，以及ACh，AChE和Na+/K+ATPase等测试试剂盒购买于南京建成生物有限公司；其余试剂均为分析纯。
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1.3 动物 SD大鼠，SPF级，3月龄，84只，雄性，体重180～220 g，饲养环境SPF级，广州中医药大学实验动物中心，动物质量合格证号SCXK(粤)20080020，动物使用许可证号SYXK(粤)20080085。
2 方法
2.1 动物分组及造模、给药方案 SD大鼠适用性饲养3 d后随机分成6组，空白对照组、假手术组、模型组、阳性药安理申组(0.125 mg·kg-1)、巴戟天低聚糖高、低剂量组(60，20 mg·kg-1)，平均每组14只。大鼠用30 g·L-1的戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉后，头顶部去毛，消毒皮肤并切开，在颅骨上用牙钻对称打2个孔(AP -3.6 mm，ML±2.5 mm，DV 3.0 mm)即为海马区注射点。每侧注射5 μL(10 μg)聚集态的Aβ2535，在5 min内注完，并留针5 min。用骨蜡填补针孔，缝合皮肤并肌肉注射青霉素。空白组不做手术处理，假手术组(用以排除手术本身的影响)在海马内注射等量的生理盐水。大鼠手术后单笼饲养至完全清醒，再同组合并。造模后第15 天开始给药。
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2.2 OMO对模型大鼠体重和脏器指数的影响 每天观察动物的外观体态(毛、色、形)和动态并作相应记录，每隔2 d测量动物体重1次，行为学检测后，处死动物，取脑、肾、脾脏、睾丸等进行相关指标检测。脏器系数=脏器质量/体重×100%。
2.3 OMO对模型大鼠氧化应激、能量代谢及胆碱能系统的影响 称取大鼠左半脑组织加9倍生理盐水制成10%匀浆，3 500×g离心10 min，取上清液，依次测定总蛋白，SOD，MDA，GSHPx，CAT，Na+/K+ATPase，ACh，AChE等指标。
2.4 统计学处理 实验数据用SPSS 16.0统计软件进行各实验组间的比较，用Dunnett′s检验进行各试验组与对照组比较。
3 结果
3.1 OMO对模型大鼠体重及脏器系数的影响 给药期间，模型组及高剂量组各有1只动物死亡，其表现为大便干燥，肚子肿大，消瘦。各给药组毛色比模型组明显光滑，未见其他异常情况。体重检测结果显示，各组动物体重差异没有显著性，提示造模和给予不同药物和不同剂量，对动物体重影响不大。对大鼠脏器系数的影响结果见表1。, 百拇医药(陈地灵，张鹏，林励，张鹤鸣，刘颂豪)