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编号:13156924
灯盏花查尔酮合成酶基因表达与灯盏乙素含量关系的研究(2)
http://www.100md.com 2013年7月15日 《中国中药杂志》 2013年第14期
     1.5 灯盏花不同部位灯盏乙素含量测定 Krosamils C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),参照药典采用的流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60),流速0.9 mL·min-1,检测波长335 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL。对照品溶液的制备参照药典制备对照品溶液,用以建立灯盏乙素标准品的线性关系。样品待测液的制备参照2005年版药典中供试品溶液的制备过程。

    2 结果

    2.1 灯盏花全长CHS的克隆及特征分析 对总RNA进行反转录成cDNA,进行PCR扩增,再用1%的琼脂糖电泳检测,获得约1 000 bp的条带,与目标片段大小相符。经过克隆测序,并采用内部片段设计反向引物进行5′RACE,克隆测序后经DNASTAR软件包拼接,获得CHS基因全长,序列长度为1 237 bp。与刘成洪已克隆测得的灯盏花CHS序列比对,一致性高达94.2%,不是同一个基因,因此,推测灯盏花中应该存在2个或2个以上的CHS基因,属于同一基因家族,进一步印证了前人的基因组杂交实验结果 ......
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