基于荧光测序分型技术的六味地黄丸原料分子鉴别研究(2)
1.6 测序分析PCR产物由北京睿博兴科生物技术有限公司测序部测序。使用psbA-trnH引物扩增的所用样品目的片段小于500 bp，选择GENESCAN 500LIZ内标进行测序，使用ITS，matK，trnL-trnF和rbcL 4对引物扩增的所有样品目的片段接近或大于500 bp，选择GENESCAN 1200LIZ内标进行测序。将所有测序所得结果使用GeneMarker V1.80软件进行分析。
2 结果
2.1 荧光标记引物的筛选
选择15个丹皮样品DNA作为模板，使用表2中反应条件分别对5对荧光标记引物ITS，psbA-trnH，matK，trnL-trnF，rbcL进行PCR扩增。结果表明5种引物的PCR成功率差异较大，其中psbA-trnH的PCR成功率为100%，而rbcL仅为13.3%。从扩增产物的类型上看，matK和trnL-trnF均为单峰类型，rbcL为双峰类型，psbA-trnH为五峰类型，ITS引物的峰型表现为双峰未完全分开或单峰脱尾，具体分析见表3 ......
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