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编号:12638368
分离培养方法结合PCR—SSCP技术分析六神曲中的真菌类群(2)
http://www.100md.com 2014年11月1日 中国中药杂志 2014年第21期
     1.3.1 纯培养真菌DNA的提取 将纯培养的真菌菌丝约0.2 g放入2 mL DNA提取管中,加入灭菌陶瓷珠后,使用细胞破碎仪(Precellys,法国)处理。然后采用DNA提取试剂盒 (Biomed Fungal DNA kit)进行DNA 的提取。

    1.3.2 PCR 反应体系及程序 采用引物Bt2a 5′-GGTAACCAAATCGGTGCTGCTTTC-3′以及Bt2b 5′-ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3′对真菌DNA的β-tubulin基因片段进行扩增,PCR的反应体系为:总反应体积30 μL,其中ddH2O 12 μL,2×PCR mix 15 μL,Bt2a(10 μmol·L-1) 1 μL,Bt2b(10 μmol·L-1) 1 μL,模板 DNA 1 μL。PCR反应程序为 94 ℃ 5 min;94 ℃ 40 s ......
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