天然活性小分子靶标蛋白识别方法学研究进展(3)
2.2光亲和基团活性蛋白质谱技术(PAL-ABPP)用于分子靶标寻找案例 拉二烯内酯(pladienolide)是一种具有天然抗肿瘤活性的大环内酯类化合物，研究人员通过对其进行结构改造，在其结构中同时引入biotin标签分子和光亲和基团偶氮丙啶，构建了一种抗肿瘤光亲和分子探针(图3d)。该研究组通过光交联亲和纯化技术，让构建的光亲和分子探针与细胞内的靶标蛋白进行交联，并通过hiotin标签富集到了相应的靶标蛋白经液相质谱鉴定，该靶标蛋白为剪切因子3b(splicing factor 3b，SF3b)中的3型亚基(SAP130)。进一步研究还发现，Pladienolide可以直接作用于SAP130，进而抑制SF3b蛋白复合物的功能，降低其在细胞内对特定核酸的剪切能力，抑制肿瘤细胞增殖并实现抗肿瘤作用。另外一个比较特殊的案例是天然产物槲皮素(quercetin)的靶标蛋白识别由于槲皮素自身就具有光反应活性，因此可以自身结构为基础构建光亲和反应探针，研究人员在其酚羟基基础上通过酯化反应引入biotin标签分子，进而构建光亲和分子探针(图3e)。由于quercetin与靶标蛋白结合后，在紫外光照射下可以对蛋白进行光标记，进而捕捉靶标蛋白然后再利用quercetin上的biotin标签富集和纯化靶标蛋白 ......
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