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编号:12835582
何首乌肝毒性物质基础探索研究(3)
http://www.100md.com 2016年4月1日 《中国中药杂志》2016年第7期
     212细胞培养HepG2细胞用含10% FBS的MEM培养液置于37 ℃,5% CO2的培养箱中培养,倒置显微镜下观察细胞生长至近融合状态时采用消化法传代。传代时,倒掉旧的培养基,再用MEM洗1~2次,加入025% TrypsinEDTA 1 mL,消化大约3 min,倒置显微镜下观察,待细胞相互分离,胞质回缩,胞体变圆后,立即加含血清培养基2~3 mL终止消化,用弯头吸管按部位轻轻吹打使细胞完全脱离瓶壁,最后将吸管尖部置于瓶底一角上下吹打数次,形成细胞悬液。再将细胞悬液转移到离心管,500 r·min-1离心5 min,离心完毕,弃上清液,再加入完全培养基吹匀,将细胞悬液分装至 2~3个新培养瓶中,置培养箱内继续培养。

    213MTT法检测药物对细胞的毒性作用胰酶消化处于对数期的HepG2细胞,终止消化后离心,收集细胞将其制成悬液,细胞计数调整其浓度至2×105个/mL,接种于 96 孔板中,每孔加入200 μL细胞混悬液,置 37 ℃,5% CO2的培养箱中培养至细胞单层铺满孔底 ......
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