苦豆子遗传转化体系建立及SaLDC启动子缺失分析(3)

http://www.100md.com 2017年5月15日 《中国中药杂志》2017年第10期

     2.5 苦豆子外植体GUS组织化学染色

    经农杆菌侵染或未侵染的苦豆子外植体或愈伤用GUS组织化学染色液进行染色，37 ℃过夜，75%乙醇脱色，期间更换数次直至洗脱液无色为止，仔细观察、统计染色情况并拍照。染色液组成：50 mmol·L^-1磷酸钠缓冲液(pH 7.0)，50 mmol·L^-1铁氰化钾，50 mmol·L^-1亚铁氰化钾，0.1 mol·L^-1 Na2EDTA，1 g·L^-1X-Gluc。

    2.6 统计分析

    利用DPS 6.0对所有数据进行方差分析。

    3 结果与分析

    3.1 农杆菌介导的苦豆子瞬时转化体系的建立和优化

    3.1.1 农杆菌菌液浓度对瞬时转化的影响 将预培养15 d的苦豆子愈伤，分别在菌液浓度A600为0.3，0.6，0.9，1.2的农杆菌菌液中侵染15 min，黑暗共培养48 h，结果表明菌液浓度对转化效率具有显著影响(P<0.05)。在A600为0.3～0.9时 ......