1.3.2.3 PCR扩增 按实验操作样品数n在1离心管中分别加入TB缓冲液n×18 μL，MgCl2 n×3 μL，TB荧光探针n×3 μL，Taq酶n×2 μL摇匀后在旋涡振荡器上再振荡10 s，低速离心数秒后按每管26 μL分装。处理上清液，在反应管中加入阴性对照品及校准品各4 μL，混匀后置于PCR 仪上，立即进行PCR扩增反应(条件：50℃预反应2 min，94℃预变性5 min，94℃5 s，60℃40 s，循环40次)。

    1.3.2.4 结果判断 ①PCR产物：将1.5 μL 6×上样缓冲液与8 μL产物混合摇匀，加样于1%琼脂糖，电泳缓冲液为1×TBE，恒压100 V下电泳30 min，观察在紫外线下163 bp的DNA片段，有DNA带为阳性结果，无DNA带为阴性结果。②荧光定量产物：反应结束后，利用Sequence Detector V 6.3软件给予数据处理，按照每批实验中的阳性对应的报告荧光信号数值，建立标准曲线，通过测定每一个待测样品的循环数阈值(threshold cycle，Ct)，应用标准曲线计算出检测样品中的扩增片段的拷贝数。

    1.4 统计学方法 所有的统计学分析均使用SPSS 17.0统计数据软件包 ......