小分子抗肿瘤化合物SPH0396在不同种属体内外代谢的比较(2)

http://www.100md.com 2017年7月25日 上海医药2017年第21期

     每个孵育体系总体积为100 μl，介质为100 mmol/L磷酸缓冲液(PBS，pH 7.4)，包括终浓度为3 μmol/L的SPH0396和0.5 mg/ml肝微粒体蛋白，采用37 ℃水浴进行孵育，预孵育3 min后，向缓冲液-底物-微粒体蛋白混合物中加入1 mmol/L的NADPH起始反应，反应60 min后加入同体积冰冷乙腈终止反应。所有孵育样本均为双样本。

    每一种属肝微粒体孵育液取双样本各60 ml合并，涡流混合1 min，离心5 min(14 000 r/min)，全取上清液，转移至1.5 ml EP管中，40 ℃氮气流下吹干，残留物以120 ml乙腈-水(10∶90， v/v)溶解，取10 ml进行UPLC-UV/Q-TOF MS分析。

    1.3.2 体内动物实验方法和样品的制备

    健康雄性比格犬和食蟹猴各2只，试验前禁食12 h，自由饮水，以10 mg/kg的剂量口服灌胃(给药容积为2 ml/kg) ......