落PCR鉴定，结果显示(图2)，PCR产物的大小均在1200bp左右，与理论值一致，挑取的12个克隆全部为阳性。

    2.2 RT-PCR鉴定结果

    为了验证干扰质粒在RNA水平上的干扰效果，我们将干扰质粒转染至HEK293T细胞48h后，提取RNA，以空的干扰载体(pRNAT-U6.1/Neo)为对照组，结果表明转染效率达90%以上(图3)，RT-PCR产物电泳后对条带进行灰度扫描，计算干扰条带与相应内参条带的灰度比值，结果显示干扰质粒siB₂和质粒siB₄的干扰BACEl效果较好(图4)，构建的siB₂和siB₄质粒明显干扰HEK293T细胞中内源性BACEl RNA表达，其中siB₄的干扰效果最好，与对照组相比，可达到90%以上。

    2.3 Western blotting鉴定结果

    由于存在一些在RNA水平上有干扰效果但是蛋白水平干扰不佳的现象，所以我们用Westernblotting的方法进一步验证了干扰质粒在蛋白水平上的干扰效果 ......