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编号:11608535
β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定(1)
http://www.100md.com 2007年9月1日 《生命科学研究》 2007年第3期
β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定
β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定
β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定
β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定

     摘 要:选择人、小鼠和大鼠的BACE/基因的共有序列为干扰的靶标,设计4对干扰片段连接至带有GFP和U6 RNA聚合酶启动子的PRNATU6.1载体,将构建好的质粒转染HEK293T细胞,通过RT-PCR和westernblotting的方法分别在RNA和蛋白水平上来检测BACEl和Aβ,以鉴定其干扰效率,并通过夹心ELISA的方法进一步在过表达蛋白APP和BACEl的HEK293T细胞体系中验证干扰质粒对A6l一42生成的影响,RT-PCR和western blotting结果提示β分泌酶的siRNA能干扰BACEl和AJCI RNA和蛋白水平表达,效率分别达到90%和80%,Westerm blotting和ELISA结果提示,β分泌酶的siRNA也降低ABl-42生成。

    关键词:Alzhcimer’s病;RNAi;β分泌酶;β淀粉样肽

    中图分类号:Q189 文献标识码:A 文章编号:1007-7847(2007)03-0200-06

    在散发性AD病人大脑中,Aβ产物的增加与β分泌酶(Beta amyloid precursor protcin cleavingenzyme ......
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