乌头总生物碱贴片皮肤安全性的研究
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摘要：目的观察乌头总生物碱贴片对动物皮肤的毒性作用。方法用健康新西兰兔进行皮肤单次及多次给药刺激性实验；用健康豚鼠进行皮肤过敏性实验。结果乌头总生物碱贴片中剂量组单次给药时未见对新西兰兔完整皮肤有刺激性反应，对破损皮肤有轻度刺激性；多次给药对兔完整皮肤无刺激反应，对破损皮肤有中度刺激反应。但停药后刺激反应消失，皮肤恢复正常。乌头总生物碱贴片中剂量组对豚鼠完整皮肤无致敏作用。结论乌头总生物碱贴片皮肤局部用药有较好的安全性，为临床应用提供了安全性保证。乌头总生物碱贴片的处方合理，制备工艺可靠。
关键词：乌头碱；刺激性；给药；皮肤；致敏性
中图分类号：R985文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)08-0014-04
川乌为毛茛科植物乌头(Aconitum carmichaeli Debx.)的干燥母根，为常用中药，具有祛风除湿，温经止痛之功效。川乌发挥药效的主要成分为生物碱类物质，现代药理学实验表明，乌头总生物碱具有镇痛、抗炎、免疫、抗肿瘤及强心等作用[1]，临床上用于治疗风湿、类风湿、关节炎、癌症晚期疼痛等病症。现有的给药方式有注射剂、片剂、丸剂等[2]，但口服制剂在胃肠道中产生首过效应，注射剂在注射部位产生疼痛和肿块。贴片通过局部透皮给药方式吸收，使局部药物浓度高，作用时间持久，有效地避免了胃肠道破坏及肝脏的首过效应，提高了药物的生物利用度和治疗安全性，是一种比较理想的给药方式。我们采用了大孔吸附树脂纯化川乌的乌头总生物碱，将其制成贴片，以10% 1,2-丙二醇和1%氮酮为促透剂，压敏胶为粘合剂制成粘胶骨架型贴片。本研究在制备乌头透皮给药系统的基础上，通过观察其皮肤刺激性及过敏性，评价乌头总生物碱贴片外用的安全性，为临床用药提供理论依据。
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1材料
1.1药物
乌头总生物碱贴片(自制)；贴片赋形剂(基质混合液)；脱毛剂(Na2S·9H2O)5 g，洗衣粉1 g，加50 mL水溶解)；2,4-二硝基氯代苯为分析纯。
1.2动物
新西兰家兔(合格证号：黑动字第P00101016)，体重2.0±0.2 kg，雌雄兼用。豚鼠(合格证号：黑动字第P00101014)，体重350~400 g，雌雄兼用。实验动物均由黑龙江省肿瘤防治研究所提供。
2实验方法与结果
2.1皮肤刺激性实验
2.1.1单次给药皮肤刺激性实验实验前24 h用脱毛剂脱去家兔背部脊柱两侧毛约50 cm2(相当于家兔体表面积的10%)。破损皮肤组用砂纸划破去毛消毒过的皮肤，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度基本一致。实验采用同体左右侧自身对比，每组4只。完整皮肤组分3组，Ⅰ组为贴片高剂量(含乌头总生物碱30 mg/g)，Ⅱ组为贴片中剂量(含乌头总生物碱15 mg/g)，Ⅲ组为贴片低剂量(含乌头总生物碱7.5 mg/g)。破损皮肤组分2组，Ⅳ组为中剂量组，Ⅴ组为低剂量组。左侧去毛区贴约8.8 cm2的受试药物，右侧涂赋形剂作为对照(空白)，用纱布、胶布固定。每只动物分笼饲养。给药24 h后，用温水洗去残留受试药物[3-5]。于去除受试药物后1，24，48，72 h，肉眼观察皮肤有无红斑(包括焦痂)和水肿，按表1评分。皮肤刺激性强度的评价标准见表2。刺激分值评价：刺激分值=(红斑反应总分+水肿反应总分)/每组动物数。
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结果表明，单次给予乌头总生物碱贴片高剂量对家兔完整皮肤有轻度刺激性，故推断对其破损皮肤也有刺激性。单次给予中剂量对家兔完整皮肤未见有刺激性，破损皮肤可见轻微红斑、水肿，强度为轻度刺激性。单次给予低剂量对家兔完整皮肤和破损皮肤均未见有刺激性。结果见表3。
2.1.2多次给药皮肤刺激性实验实验方法按2.1.1项进行，连续给药7 d，停药后再观察7 d。结果表明，多次给予乌头总生物碱贴片高剂量对家兔完整皮肤有中度刺激性，故推断对破损皮肤也有刺激性；多次给予中剂量对家兔完整皮肤未见有刺激性，破损皮肤可见中度红斑、中度水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙等异常反应，强度为中度刺激性；多次给予低剂量对家兔完整皮肤未见有刺激性，对破损皮肤可见轻度红斑、轻度水肿，强度为轻度刺激性。见表4。
2.2皮肤过敏性试验
随机将动物分为5组，每组10只，Ⅰ组为高剂量组(含乌头总生物碱30 mg/g)，Ⅱ组为中剂量组(15 mg/g)，Ⅲ组为低剂量组(7.5 mg/g)，Ⅳ组为赋型剂组，Ⅴ组为阳性对照组(1% 2,4-二硝基氯代苯)，实验动物于每次涂药前24 h用脱毛剂脱去背部毛，脱毛范围为每侧约3 cm×3 cm，左侧为涂药区，右侧为激发区。
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致敏接触：每只动物分别给约8.8 cm2乌头总生物碱贴片、1g赋型剂、1% 2,4-二硝基氯代苯0.2 mL，涂于背部左侧脱毛区，涂药期间动物单笼饲养，使药物与皮肤接触6 h，第7天和第14天用同法重复给药1次。
激发接触：于末次涂药后14 d，将约8.8 cm2乌头总生物碱贴片、1 g赋型剂和0.1% 2,4-二硝基氯代苯0.2 mL涂于背部右侧脱毛区，6 h后去除受试药物，即刻观察，然后于24，48，72 h再观察皮肤有无红斑、水肿等过敏反应，根据反应程度不同，按下式计算致敏发生率和用表5评分标准计算平均分值[6,7]。
致敏发生率(%)= 过敏反应动物数(只)×100%/动物总数(只)
皮肤过敏反应：观察皮肤有无红斑、水肿等。按表5评分标准评分和表6标准评价过敏性。反应观察时间为去除药物后0，24，48，72 h。
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实验结果表明：乌头总生物碱贴片高剂量组对豚鼠皮肤有轻度致敏作用，中剂量组和低剂量组对豚鼠皮肤无致敏性，其致敏发生率分别为30%，10%，10%，其采用的赋形剂也无致敏性。2,4-二硝基氯代苯对豚鼠皮肤致敏发生率为70%，平均分值给药6 h后为 2.2±0.9，24 h后为1.6±0.5，48 h后为1.0±0.12，见表7。
3结论
本研究观察了乌头总生物碱对动物皮肤的刺激性及过敏性。实验结果表明，高剂量乌头总生物碱贴片单次给药对家兔完整皮肤有轻度刺激性，多次给药有中度刺激性，且对豚鼠皮肤有轻度致敏作用，致敏发生率为30%；中剂量乌头总生物碱贴片单次给药对家兔完整皮肤未见有刺激性，对破损皮肤有轻度刺激性。多次给药对家兔完整皮肤未见有刺激性，对破损皮肤有中度刺激性，对豚鼠皮肤无致敏性，致敏发生率为10%；低剂量乌头总生物碱贴片单次给药对家兔完整皮肤和破损皮肤均未见有刺激性，多次给药对家兔完整皮肤未见有刺激性，对破损皮肤有轻度刺激性。停药后上述刺激反应消失，表明乌头总生物碱贴片在此剂量下对家兔皮肤的刺激反应是可逆的。结合前期乌头总生物碱贴片的药效学研究表明，高剂量及中剂量乌头总生物碱贴片均有抗炎镇痛效果，故以中剂量为临床最佳使用剂量。
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综上所述，乌头总生物碱贴片的处方合理，制备工艺可靠，是安全性较好的外用制剂，值得临床推广应用。
参考文献
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