ELISA法检测乙肝标志物的临床应用(1)
[摘要] 目的 探讨ELISA法检测健康体检者血清中HBsAg的临床效果。 方法 用三个不同公司生产的乙肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒，通过ELISA法检测220例健康体检患者血清中HBsAg水平，检测出的阳性标本再用免疫胶体金试纸条检测，比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性。 结果 江莱、万泰、新创三家厂家生产的试剂盒检测HBsAg阳性率分别为12.3%(27/220)、9.5%(21/220)、13.6%(30/220)。新创阳性率最高。阳性血清经金标试纸条检测阳性结果分别为24、18、27例。新创试剂盒ELISA法检测抗原包被浓度为1.25 IU/L时，仍可检出阳性标本。其他两个试剂盒最低检出浓度为2.5 IU/L，差异无统计学意义(χ2=1.25，P > 0.05)。 结论 不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行印证。
[关键词] ELISA法；胶体金法；乙肝；诊断
, 百拇医药 [中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)01(c)-0089-02
Clinical application of ELISA in the detection of hepatitis B markers
ZHAO Liaoqun
Department of Laboratory, Maternal and Child Care Service Center of Yan'an City, Shaanxi Province, Yan'an 716000, China
[Abstract] Objective To evaluate the clinical efficacy of ELISA in the detection of serum hepatitis B surface antigen (HBsAg) in healthy subjects. Methods HBsAg serum levels of 220 healthy subjects were detected by ELISA method with HBsAg assay kit manufactured by three different companies and the positive samples were then tested with immune colloidal gold dipsticks. The consistency of positive rate of the assay kit manufactured by the three different companies with the gold standard test strip assay was evaluated. Results Test positive rate of the assay kits manufactured by Jianglai, Wantai and Xinchuang was 12.3% (27/220), 9.5% (21/220) and 13.6% (30/220) respectively. The gold standard test strip results were positive in 24 cases, 18 cases, 27 cases among the positive serum. Coating concentration of the assay kit manufactured by Xinchuang was 1.25 IU/L and was 2.5 IU/L for the assay kits manufactured by the other two companies, and the differences were no significant (χ2 = 1.25, P > 0.05). Conclusion Test results of ELISA kits by different manufacturers are different, thus it is necessary in clinical application to confirm test results by combined use of several assay kits and other tests.
, http://www.100md.com
[Key words] ELISA method; Colloidal gold method; Hepatitis B; Diagnosis
乙肝两对半又称乙肝五项，为国内常用的乙肝病毒(HBV)感染的检测血清标志物。乙肝病毒免疫学标记有表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(抗HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗HBc或HBcAb)[1]，可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA)因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测[2]。但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大。因此如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测中至关重要的问题之一。本研究分别选择3家国产ELISA试剂盒对来我院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，现报道如下：
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2005年6月～2010年11月健康体检患者220例，其中，男140例，女80例；年龄23～50岁，平均38.5岁。抽取患者静脉血，分离血清，低温(15℃)保存待检。
1.2 方法
1.2.1 检测试剂 检测试剂盒分别购自上海江莱生物科技有限公司(简称江莱)，北京万泰生物药业股份有限公司(简称万泰)、英科新创(厦门)科技有限公司(简称新创)。其中包括96孔(48人份)酶标板，阴性对照1 mL，阳性对照1 mL，酶结合物6 mL，显色剂A 6 mL，显色剂B 6 mL，20倍洗涤液40 mL，终止液6 mL，说明书1份，不干胶3张，自封袋1个。抗HBV金标试纸条购自新创。
1.2.2 检测仪器 振荡器(型号ZD-8800)，磁力搅拌器(型号JB90-D)均购自上海精密仪器仪表有限公司，酶标仪购自郑州安图生物工程有限公司，型号：Anthos2010。
, http://www.100md.com
1.2.3 检测方法 采用ELISA法检测。严格按照试剂盒操作步骤进行，即：①使用前，充分混匀所有试剂，勿产生泡沫。②根据待测样品数量确定所需酶标板数量。每次实验设空白对照孔1孔，阴性对照、阳性对照各2孔。待检标本用稀释液1∶1稀释后加入50 μL于酶标板反应孔内。采用棋盘法做倍比稀释，使标本浓度依次为40、20、10、5.0、2.5、1.25、0 IU/L。同样方法稀释阴性血清。③加入稀释好后的标准品及阴性血清50 μL于反应孔，待测样品50 μL于反应孔内，立即加入50 μL的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃孵育1 h。④甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作5次。⑤每孔加入80 μL的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃孵育30 min。⑥重复步骤④1次。⑦每孔加入底物A、B各50 μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min。避免光照。⑧取出酶标板，迅速加入50 μL终止液，加入终止液后应立即测定结果。⑨在450 nm波长处测定各孔的OD值。分别用3个不同公司的试剂盒进行初测，初测ELISA阳性标本再采用胶体金法测定1次。金标试纸条于检测线及对照线位置处各出现一条紫红色线条为阳性，只于对照线位置出现1条紫红色线条为阴性，未出现任何线条表示金标试纸条失效。, http://www.100md.com(赵辽群)
[关键词] ELISA法；胶体金法；乙肝；诊断
, 百拇医药 [中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)01(c)-0089-02
Clinical application of ELISA in the detection of hepatitis B markers
ZHAO Liaoqun
Department of Laboratory, Maternal and Child Care Service Center of Yan'an City, Shaanxi Province, Yan'an 716000, China
[Abstract] Objective To evaluate the clinical efficacy of ELISA in the detection of serum hepatitis B surface antigen (HBsAg) in healthy subjects. Methods HBsAg serum levels of 220 healthy subjects were detected by ELISA method with HBsAg assay kit manufactured by three different companies and the positive samples were then tested with immune colloidal gold dipsticks. The consistency of positive rate of the assay kit manufactured by the three different companies with the gold standard test strip assay was evaluated. Results Test positive rate of the assay kits manufactured by Jianglai, Wantai and Xinchuang was 12.3% (27/220), 9.5% (21/220) and 13.6% (30/220) respectively. The gold standard test strip results were positive in 24 cases, 18 cases, 27 cases among the positive serum. Coating concentration of the assay kit manufactured by Xinchuang was 1.25 IU/L and was 2.5 IU/L for the assay kits manufactured by the other two companies, and the differences were no significant (χ2 = 1.25, P > 0.05). Conclusion Test results of ELISA kits by different manufacturers are different, thus it is necessary in clinical application to confirm test results by combined use of several assay kits and other tests.
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[Key words] ELISA method; Colloidal gold method; Hepatitis B; Diagnosis
乙肝两对半又称乙肝五项，为国内常用的乙肝病毒(HBV)感染的检测血清标志物。乙肝病毒免疫学标记有表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(抗HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗HBc或HBcAb)[1]，可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA)因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测[2]。但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大。因此如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测中至关重要的问题之一。本研究分别选择3家国产ELISA试剂盒对来我院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，现报道如下：
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2005年6月～2010年11月健康体检患者220例，其中，男140例，女80例；年龄23～50岁，平均38.5岁。抽取患者静脉血，分离血清，低温(15℃)保存待检。
1.2 方法
1.2.1 检测试剂 检测试剂盒分别购自上海江莱生物科技有限公司(简称江莱)，北京万泰生物药业股份有限公司(简称万泰)、英科新创(厦门)科技有限公司(简称新创)。其中包括96孔(48人份)酶标板，阴性对照1 mL，阳性对照1 mL，酶结合物6 mL，显色剂A 6 mL，显色剂B 6 mL，20倍洗涤液40 mL，终止液6 mL，说明书1份，不干胶3张，自封袋1个。抗HBV金标试纸条购自新创。
1.2.2 检测仪器 振荡器(型号ZD-8800)，磁力搅拌器(型号JB90-D)均购自上海精密仪器仪表有限公司，酶标仪购自郑州安图生物工程有限公司，型号：Anthos2010。
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1.2.3 检测方法 采用ELISA法检测。严格按照试剂盒操作步骤进行，即：①使用前，充分混匀所有试剂，勿产生泡沫。②根据待测样品数量确定所需酶标板数量。每次实验设空白对照孔1孔，阴性对照、阳性对照各2孔。待检标本用稀释液1∶1稀释后加入50 μL于酶标板反应孔内。采用棋盘法做倍比稀释，使标本浓度依次为40、20、10、5.0、2.5、1.25、0 IU/L。同样方法稀释阴性血清。③加入稀释好后的标准品及阴性血清50 μL于反应孔，待测样品50 μL于反应孔内，立即加入50 μL的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃孵育1 h。④甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作5次。⑤每孔加入80 μL的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃孵育30 min。⑥重复步骤④1次。⑦每孔加入底物A、B各50 μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min。避免光照。⑧取出酶标板，迅速加入50 μL终止液，加入终止液后应立即测定结果。⑨在450 nm波长处测定各孔的OD值。分别用3个不同公司的试剂盒进行初测，初测ELISA阳性标本再采用胶体金法测定1次。金标试纸条于检测线及对照线位置处各出现一条紫红色线条为阳性，只于对照线位置出现1条紫红色线条为阴性，未出现任何线条表示金标试纸条失效。, http://www.100md.com(赵辽群)