羟基红花黄色素A对胶质瘤U251细胞增殖、迁移与侵袭的影响(1)
[摘要] 目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其作用机制。 方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞，经不同浓度(25、100、400 μmol/L)HSYA处理后分别采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、划痕试验和Transwell试验观察HSYA对U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响，采用Western blot方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达水平。 结果 与空白对照组比较，HSYA能降低U251细胞存活率，缩短细胞迁移距离，减少U251细胞穿膜数，差异均有统计学意义(P < 0.01或P < 0.05)，同时，HSYA能下调MMP-2、MMP-9的蛋白表达。 结论 HSYA对脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭等具有抑制作用，其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9表达有关。
[关键词] 羟基红花黄色素A；胶质瘤细胞；抑制作用
[中图分类号] R739.41 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)09(c)-0015-04
[Abstract] Objective To investigate the effects of hydroxysafflor yellow A (HSYA) on proliferation， migration and invasion of glioma U251 cells， and to explore its mechanism. Methods The human glioma U251 cells were cultured in vitro and treated with different concentrations of HSYA (25， 100， 400 μmol/L)， then the methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay， scratch test and Transwell assay were used to observe the effects of HSYA on proliferation， migration and invasion of U251 cells respectively， and the expression levels of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and MMP-9 were examined by Western blot assay. Results Compared with blank control group， the U251 cell viability in HSYA group was decreased， the migration distance was shortened， the number of penetrated cells was reduced obviously， the differences were all statistically significant (P < 0.01 or P < 0.05). Moreover， HSYA could decrease the expression of MMP-2 and MMP-9. Conclusion HSYA has inhibitory effects for the proliferation， migration and invasion of glioma cells， and the mechanism may be related to the inhibition of MMP-2 and MMP-9 expression.
[Key words] Hydroxysafflor yellow A； Glioma cells； Inhibitory effect
神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，具有发病率、病死率和复发率高的特点。对于恶性胶质瘤的治疗，现阶段主要为手术切除，术后辅以放疗和化疗，但由于恶性胶质瘤的侵袭性强，术后容易复发，总体治疗效果不理想。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是中国传统中药红花中含量最高的主要活性成分，具有显著的药理活性[1]。近年来多项研究表明HSYA具有抗肿瘤作用[2-4]，本研究观察HSYA对胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭等作用，以及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等的表达情况，探讨HSYA对胶质瘤细胞的抗肿瘤作用及机制，为研究高效、低毒的中药抗肿瘤药物提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 细胞培养
胶质瘤U251细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库)用含10%胎牛血清MEM培养基(美国Gibco公司)于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
1.2 MTT法测定U251细胞增殖
取对数生长期的U251细胞，以2×104个/mL密度接种于96孔板，贴壁24 h后，经不同浓度HSYA(25、100、400 mmol/L)(中国食品药品检定研究院，批号111637-201308)、阳性对照替莫唑胺(100 mmol/L)(Sigma公司)处理72 h，加入MTT液使终浓度为0.5 mg/mL，继续培养4 h后，弃去孔内液体，加入100 mL二甲基亚砜(DMSO)溶解蓝紫色复合物，震荡10 min，于酶标仪上490 nm波长处测定吸光度值(A490)。细胞存活率=处理组A490/对照组A490×100%。
1.3 划痕试验检测U251细胞迁移
将对数生长期的U251细胞按照5×104个/mL密度接种于96孔板中培养，细胞贴壁后，用无菌100 mL枪头于细胞层中横向划线，形成宽度均匀一致的划痕，造成细胞伤口模型，在显微镜下拍照，测定划痕宽度。24 h后测定划痕宽度。使用Image软件测量划痕距离，每条划痕取3个测量点，计算平均宽度值。 (袁玉梅 楼亚玲)
[关键词] 羟基红花黄色素A；胶质瘤细胞；抑制作用
[中图分类号] R739.41 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)09(c)-0015-04
[Abstract] Objective To investigate the effects of hydroxysafflor yellow A (HSYA) on proliferation， migration and invasion of glioma U251 cells， and to explore its mechanism. Methods The human glioma U251 cells were cultured in vitro and treated with different concentrations of HSYA (25， 100， 400 μmol/L)， then the methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay， scratch test and Transwell assay were used to observe the effects of HSYA on proliferation， migration and invasion of U251 cells respectively， and the expression levels of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and MMP-9 were examined by Western blot assay. Results Compared with blank control group， the U251 cell viability in HSYA group was decreased， the migration distance was shortened， the number of penetrated cells was reduced obviously， the differences were all statistically significant (P < 0.01 or P < 0.05). Moreover， HSYA could decrease the expression of MMP-2 and MMP-9. Conclusion HSYA has inhibitory effects for the proliferation， migration and invasion of glioma cells， and the mechanism may be related to the inhibition of MMP-2 and MMP-9 expression.
[Key words] Hydroxysafflor yellow A； Glioma cells； Inhibitory effect
神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，具有发病率、病死率和复发率高的特点。对于恶性胶质瘤的治疗，现阶段主要为手术切除，术后辅以放疗和化疗，但由于恶性胶质瘤的侵袭性强，术后容易复发，总体治疗效果不理想。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是中国传统中药红花中含量最高的主要活性成分，具有显著的药理活性[1]。近年来多项研究表明HSYA具有抗肿瘤作用[2-4]，本研究观察HSYA对胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭等作用，以及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等的表达情况，探讨HSYA对胶质瘤细胞的抗肿瘤作用及机制，为研究高效、低毒的中药抗肿瘤药物提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 细胞培养
胶质瘤U251细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库)用含10%胎牛血清MEM培养基(美国Gibco公司)于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
1.2 MTT法测定U251细胞增殖
取对数生长期的U251细胞，以2×104个/mL密度接种于96孔板，贴壁24 h后，经不同浓度HSYA(25、100、400 mmol/L)(中国食品药品检定研究院，批号111637-201308)、阳性对照替莫唑胺(100 mmol/L)(Sigma公司)处理72 h，加入MTT液使终浓度为0.5 mg/mL，继续培养4 h后，弃去孔内液体，加入100 mL二甲基亚砜(DMSO)溶解蓝紫色复合物，震荡10 min，于酶标仪上490 nm波长处测定吸光度值(A490)。细胞存活率=处理组A490/对照组A490×100%。
1.3 划痕试验检测U251细胞迁移
将对数生长期的U251细胞按照5×104个/mL密度接种于96孔板中培养，细胞贴壁后，用无菌100 mL枪头于细胞层中横向划线，形成宽度均匀一致的划痕，造成细胞伤口模型，在显微镜下拍照，测定划痕宽度。24 h后测定划痕宽度。使用Image软件测量划痕距离，每条划痕取3个测量点，计算平均宽度值。 (袁玉梅 楼亚玲)