Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪HBV—DNA检测系统的性能验证(3)
1.4.3.1 线性1，数据拟合的最佳形式为直线，所有数据几乎均落在一条直线上，且数据的精密度较高。该范围为线性范围。
1.4.3.2 线性2，数据拟合的最佳形式为非直线，但数据均在的可接受范围内，数据拟合非线性无临床意义。该范围为线性范围。
1.4.3.3 非线性，数据拟合的最佳形式为非直线，且数据超过了线性的可接受范围，并可能有临床意义。
1.4.3.4不精密，每份样本的重复性差，数据有较大变异，导致统计学功效降低，不能用于评价线性。
如果判断结果为非线性，则舍去最高点或最低点数据，另做回归分析统计，直至出现线性1或线性2。如果判断结果为不精密，则需查看检测数据，判断不精密的原因，并进行纠正。
1.4.4 临床可报告范围评价标准
, http://www.100md.com
当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。
1.4.5 抗干扰能力评价标准
检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%。
2 结果
2.1 HBV-DNA精密度评估结果
精密度性能验证结果详见表1、2。HBV-DNA低值和高值的批内CV分别为5.21%(低浓度)、3.40%(高浓度)和中值的批间CV为3.45%(批间)，小于厂家声明的10%，CV 批内和CV批间均符合厂家声明。同时也满足批内精密度CV%小于1/4总允许误差(TEa)(1/4×0.4=0.1)，批间精密度CV%小于1/3总允许误差(TEa)(1/3×0.4=0.13)。
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表1 HBV-DNA批内精密度评估结果
表2 HBV-DNA批间精密度评估结果
2.2 HBV-DNA正确度的评价结果
参加2016年卫计委室间质评和湖北省临检中心室间质评，PT成绩100%，验证通过 。
2.3 线性范围验证结果
本研究检测的高浓度患者标本为2.32×108(血清来自通过ISO15189认可的湖北省中医院花园山院区检验科)，对其连续10倍稀释来进行线性范围的验证，得到的线性范围是5.00×102～2.84×108 U/mL，在厂家声明的5×102～1×108 U/mL范围内。见图1 。
线性范围为5.00×102～2.84×108 U/mL，P < 0.05
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图1 线性范围验证回归曲线
2.4 临床可报告范围的评估
荧光定量PCR法HBVDNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统的线性范围分别为5.00×102～1.00×108 U/mL。而本实验的线性范围验证可检测5.00×102～2.84×108 U/mL，该范围足够大，103～108 U/mL可为其的临床可报告范围。
2.5 抗干扰能力评估
在5个不同分析物浓度血浆中加入不同干扰物(胆红素、三酰甘油)后进行检测分析，分别检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%(标准参考CNAS-CL36：《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》附录A)。检测结果见表3。
3 讨论
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检测系统或方法学的分析性能评价是保证临床检验质量的重要内容。ISO15189是国际 医学界普遍承认并遵照执行的关于医学实验室质量和能力方面要求的国际标准[12]。临床实验室在引入新的检测系统或检测方法时，多数厂家均提供了较为完整的性能参数，但需验证其性能[13]。在临床检验工作中，如果均由生产商进行实验室各新仪器验收校准以及定期校准，其校准结果具有局限性，可信性较差[14-16]。本实验所有患者标本来源于我院花园山院区，我院花園山院区于2013年通过ISO15189实验室认可，血清标本质量可靠，对比性可信。本文依照依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO15189：2012)对医学实验室检测系统性能评价的相关要求以及CNAS-CL36：《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》，对我院光谷分院新购置的Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪进行性能评价，从精密度、准确度、线性范围、临床可报告范围、抗干扰因素等方面对Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪进行验证。
精密度的检测反映检测结果的重复性，本实验数据中，HBV-DNA低值和高值的批内CV分别为5.21%、3.40%，批间CV为3.45%，小于厂家声明的10%。准确度是评价仪器测量结果与真值的一致程度。一种方案是通过检测有证参考物质，依据偏倚计算正确度。另一种是无有证参考物质时，通过参加能力验证/室间质评来进行正确度验证，依据偏倚计算正确度[10]。本次实验采用第二种方案，即采用国家卫生部临检中心和湖北省临检中心发放的室间质评物作为标准物质，检测了2016年全国室间质评的5个阳性标本，湖北省临检中心室间质评5个标本，结果全部通过，PT成绩100%。线性范围指标本不需要任何预处理可以检测出待测物的浓度范围，用于线性范围验证的标本应尽覆盖整个线性范围[11]。厂家声明的线性范围为5×102～1×108 U/mL，笔者收集通过ISO15189认可的医学实验室的高浓度标本进行稀释，检测线性范围为5.00×102～2.84×108 U/mL，在厂家声明的5×102～1×108 U/mL范围内。当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。而本实验的线性范围验证可检测5.00×102～2.84×108 U/mL，该范围足够大，103～108 U/mL可为其的临床可报告范围。荧光定量PCR法HBV-DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统的线性范围分别为5×102～1×108 U/mL。该肝炎系列核酸检测分别大于1.00×108 U/mL或1.00×107 U/mL浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，若分别小于5.00×102 U/mL或1.00×103 U/mL已为临床疗效监测效果较好的指标，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。因此，当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。临床上HBV-DNA检测时，可能的干扰因素多为黄疸或脂血，本文分别比较该两种可能的干扰因素对结果的影响，分别检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%，表明抗干扰效果较好，可用于临床检测。, http://www.100md.com(王娇 钱军 石英 蔡旺喜 刘光忠)
1.4.3.2 线性2，数据拟合的最佳形式为非直线，但数据均在的可接受范围内，数据拟合非线性无临床意义。该范围为线性范围。
1.4.3.3 非线性，数据拟合的最佳形式为非直线，且数据超过了线性的可接受范围，并可能有临床意义。
1.4.3.4不精密，每份样本的重复性差，数据有较大变异，导致统计学功效降低，不能用于评价线性。
如果判断结果为非线性，则舍去最高点或最低点数据，另做回归分析统计，直至出现线性1或线性2。如果判断结果为不精密，则需查看检测数据，判断不精密的原因，并进行纠正。
1.4.4 临床可报告范围评价标准
, http://www.100md.com
当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。
1.4.5 抗干扰能力评价标准
检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%。
2 结果
2.1 HBV-DNA精密度评估结果
精密度性能验证结果详见表1、2。HBV-DNA低值和高值的批内CV分别为5.21%(低浓度)、3.40%(高浓度)和中值的批间CV为3.45%(批间)，小于厂家声明的10%，CV 批内和CV批间均符合厂家声明。同时也满足批内精密度CV%小于1/4总允许误差(TEa)(1/4×0.4=0.1)，批间精密度CV%小于1/3总允许误差(TEa)(1/3×0.4=0.13)。
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表1 HBV-DNA批内精密度评估结果
表2 HBV-DNA批间精密度评估结果
2.2 HBV-DNA正确度的评价结果
参加2016年卫计委室间质评和湖北省临检中心室间质评，PT成绩100%，验证通过 。
2.3 线性范围验证结果
本研究检测的高浓度患者标本为2.32×108(血清来自通过ISO15189认可的湖北省中医院花园山院区检验科)，对其连续10倍稀释来进行线性范围的验证，得到的线性范围是5.00×102～2.84×108 U/mL，在厂家声明的5×102～1×108 U/mL范围内。见图1 。
线性范围为5.00×102～2.84×108 U/mL，P < 0.05
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图1 线性范围验证回归曲线
2.4 临床可报告范围的评估
荧光定量PCR法HBVDNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统的线性范围分别为5.00×102～1.00×108 U/mL。而本实验的线性范围验证可检测5.00×102～2.84×108 U/mL，该范围足够大，103～108 U/mL可为其的临床可报告范围。
2.5 抗干扰能力评估
在5个不同分析物浓度血浆中加入不同干扰物(胆红素、三酰甘油)后进行检测分析，分别检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%(标准参考CNAS-CL36：《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》附录A)。检测结果见表3。
3 讨论
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检测系统或方法学的分析性能评价是保证临床检验质量的重要内容。ISO15189是国际 医学界普遍承认并遵照执行的关于医学实验室质量和能力方面要求的国际标准[12]。临床实验室在引入新的检测系统或检测方法时，多数厂家均提供了较为完整的性能参数，但需验证其性能[13]。在临床检验工作中，如果均由生产商进行实验室各新仪器验收校准以及定期校准，其校准结果具有局限性，可信性较差[14-16]。本实验所有患者标本来源于我院花园山院区，我院花園山院区于2013年通过ISO15189实验室认可，血清标本质量可靠，对比性可信。本文依照依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO15189：2012)对医学实验室检测系统性能评价的相关要求以及CNAS-CL36：《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》，对我院光谷分院新购置的Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪进行性能评价，从精密度、准确度、线性范围、临床可报告范围、抗干扰因素等方面对Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪进行验证。
精密度的检测反映检测结果的重复性，本实验数据中，HBV-DNA低值和高值的批内CV分别为5.21%、3.40%，批间CV为3.45%，小于厂家声明的10%。准确度是评价仪器测量结果与真值的一致程度。一种方案是通过检测有证参考物质，依据偏倚计算正确度。另一种是无有证参考物质时，通过参加能力验证/室间质评来进行正确度验证，依据偏倚计算正确度[10]。本次实验采用第二种方案，即采用国家卫生部临检中心和湖北省临检中心发放的室间质评物作为标准物质，检测了2016年全国室间质评的5个阳性标本，湖北省临检中心室间质评5个标本，结果全部通过，PT成绩100%。线性范围指标本不需要任何预处理可以检测出待测物的浓度范围，用于线性范围验证的标本应尽覆盖整个线性范围[11]。厂家声明的线性范围为5×102～1×108 U/mL，笔者收集通过ISO15189认可的医学实验室的高浓度标本进行稀释，检测线性范围为5.00×102～2.84×108 U/mL，在厂家声明的5×102～1×108 U/mL范围内。当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。而本实验的线性范围验证可检测5.00×102～2.84×108 U/mL，该范围足够大，103～108 U/mL可为其的临床可报告范围。荧光定量PCR法HBV-DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统的线性范围分别为5×102～1×108 U/mL。该肝炎系列核酸检测分别大于1.00×108 U/mL或1.00×107 U/mL浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，若分别小于5.00×102 U/mL或1.00×103 U/mL已为临床疗效监测效果较好的指标，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。因此，当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。临床上HBV-DNA检测时，可能的干扰因素多为黄疸或脂血，本文分别比较该两种可能的干扰因素对结果的影响，分别检测5个样品，至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%，表明抗干扰效果较好，可用于临床检测。, http://www.100md.com(王娇 钱军 石英 蔡旺喜 刘光忠)