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C反应蛋白的新应用(1)
http://www.100md.com 2008年2月24日 《中国实用医药》 2007年第7期
     C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是目前最有价值的急性时相反应蛋白,属分泌型蛋白质[1]。它最早发现于1930年,当时美国洛克菲勒研究院的Tillett和Francis发现急性感染病人的血清能和肺炎链球菌的C组分(C多糖,C-polysaccharide)发生沉淀反应[2]。到1941年,Avery等用硫酸铵沉淀和C多糖沉淀的方法粗提,得到一种蛋白质,于是正式命名为C-反应蛋白[3]。它的升高可以提示许多炎症事件的发生,长久以来被广泛应用于感染性疾病的诊断及监测,且升高程度常与炎症、组织损伤的程度呈正相关,所以现已被临床广泛应用。近年来大量的文献报道CRP的临床价值引人注目,本文就其生物学特性、测定方法以及在临床中的最新应用进展等作一综述。

    1CRP的生物学特性

    1.1CRP的结构CRP是一种主要由肝脏合成的蛋白质,用电子显微镜技术和X射线衍射技术阐明了CRP的分子结构。其分子结构是由5个完全相同的球形单体相互以非共价键形式构成的平面对称五边形的环状五球体[2]。CRP的分子量约105 500道尔顿,沉降系数为7.58,等电点为5.7~6.0。每个分子含有5个相同的未糖基化的多肽亚单位,每个亚单位由1条206个氨基酸残基,分子量23 017道尔顿的多肽链组成[4] 。白细胞介素6(IL 6)、肿瘤坏死因子a(TNF a)、白细胞介素1(IL 1)对CRP的生成有调节作用。CRP的生物学功能[1,4,5]①在钙离子存在下,能结合细菌、真菌等各种内源性和外源性的多糖物质,形成复合物后成为以C1q开始的经典补体途径的强效激活物,激活补体系统;②CRP具有重要的调理素作用,能增加巨噬细胞的活性和运动,促进对各种细菌和异物的吞噬;③它能与T淋巴细胞特异性地结合,抑制T抑制细胞和增强T辅助细胞的功能;④抑制血小板的磷脂酶,减少其炎症介质的释放。 CRP在感染、炎症、组织损伤、恶性肿瘤等刺激下,2h后即可升高,48h达峰值,超过正常水平的10倍、百倍甚至千倍,远早于体温、白细胞计数等改变。其半衰期短于24h,一旦感染被控制其浓度可迅速回落,恢复至正常。而且影响发热、血沉和白细胞增加的各种因素对CRP多无影响。同时,CRP亦不受常用抗炎药物或免疫抑制药物的直接影响。
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    2CRP的测定方法

    临床实验室CRP检测方法大致可以分为免疫沉淀法、免疫浊度法和标记免疫测定法三类。免疫沉淀法最早出现,但其方法较粗糙,结果判断时间长且准确度差, 早已停止使用。胶乳凝集试验是半定量的,由于其不良的精确度和准确度,这种方法已经基本停止使用[2]。

    目前常用的CRP检测方法有免疫浊度法(如散射、透射比浊法,并且已实现了自动化)和标记免疫测定法。其中,透射免疫和散射免疫方法,这些方法的参考值范围变动很大,从3mg/L到超过200mg/L[6]。随着人们对于低水平CRP与心血管疾病关系的认识,这些测定方法的灵敏度远远不能满足要求。为了达到所需定量的检测精度,研究人员已经对现有的实验方法进行了改良和更新。Sanchez等[7]对一种改良的免疫浊度法进行了评价,其最低检出限为0.26mg/L,日间变异系数在0.66mg/L时为10%,在CRP浓度较高时也不受胆红素、血红蛋白、甘油三酯以及类风湿因子的影响。与传统的比浊法相比,其方法简单、快速,样本体积需要量小,提高了检测的灵敏度和准确度。Hafner等[8]也报道了一种在Olympus AU640分析仪上测定CRP含量更灵敏准确的免疫浊度法,其线性范围为5~200mg/L,批内变异系数[9]对微量床旁CRP检测法进行了评价,该方法的最低检出限为0.1mg/L,线性范围在系统误差为10%和20%时分别为2~60mg/L及0.3~60mg/L;总变异在0.7~9.1mg/L时为500mg/L时才会出现,但该方法在CRP>2mg/L时准确性较高,且可用末梢血,患者易接受,可随身携带,操作简便,5min即可测得结果。此类采用超敏感方法检测到的CRP,被称为“超敏CRP(high sensitive C-reactive protein,hs-CRP)”。
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    3CRP在临床中的应用

    3.1CRP与人内皮细胞的凋亡新的研究表明[10]CRP对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡相关基因及蛋白Bcl-2/Bax表达有影响。随CRP浓度的增加诱导内皮细胞凋亡的比率逐渐增加,25mg/L时细胞凋亡率达(15.712.34)%;内皮细胞在25mg/L CRP作用4、8 h后Bax mRNA、蛋白表达逐渐增强,Bcl-2 mRNA、蛋白表达逐渐减弱,在8 h它们表达量与对照组相比差异有统计学意义(P[11]。超敏C反应蛋白,是一个敏感的亚临床系统炎症的生理标志物,与高血糖、胰岛素抵抗和Ⅱ型糖尿病有着明确的相关性[12]。hs-CRP是急性时相反应的一种主要下游介质。在啮齿动物模型体内注射人类重组hs-CRP可以导致糖异生,继而出现高血糖症和代偿性高胰岛素血症,这提示炎症在糖尿病的发病机制中可能起作用[13]。糖尿病可能是一种被自身免疫系统所启动的进行性的细胞因子介导的急性时相反应的表现。hs-CRP具有潜在自然宿主防御的特征,hs-CRP的免疫调节功能包括增加白细胞的反应性、补体结合、调节血小板活性,和从炎症部位清除细胞碎屑[11]。林芸的研究[14]发现在Ⅱ型糖尿病患者hs-CRP水平明显较非糖尿病患者增高,而且,其他炎症标志物,如纤维蛋白原较对照组也有增高。
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    韩希芹等[15]报道CRP与Ⅱ型糖尿病病人的微量白蛋白尿以及内皮功能紊乱和慢性低水平炎症相关联。CRP能通过影响内皮细胞使内皮功能受损,使微血管病变加速动脉硬化进展。CRP致DM的可能发病机制为慢性炎症,慢性炎症可能通过造成了肾血管内皮细胞和系膜细胞的损害等多种途径使肾脏损伤。随着肾功能下降血清BUN、CR上升,同时伴随着CRP的上升,且CRP比BUN、CRP升高要早、幅度更大。说明CRP浓度的变化可反应肾功能变化,是DN早期诊断的良好指标。

    张秋玲[16]为观察Ⅱ型糖尿病(T2DM)患者C反应蛋白(CRP)与细胞外基质(ECM)的变化。对64例Ⅱ型DM者和30例健康对照组的CRP、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平,并根据有无慢性并发症存在,把Ⅱ型DM者分成A、B两组,对各组间进行比较分析。结果 DM组的CRP、HA、CⅣ水平均较正常对照组有显著意义的升高(P, 百拇医药(钟冬梅)
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