参附注射液对家兔心肺复苏后心肌细胞凋亡基因caspase—3的影响(2)
将待检样品中加入浓度为0.25%胰蛋白酶进行消化，温度为37℃，将细胞收集后均匀吸出上层，反复操作5～6次。将混悬液进行离心处理，时间为10 min，转速为2000 r/min。采用DMEM洗涤后再次将混悬液进行离心处理，时间为10 min，转速同上。将上清液撇去后向其中加入浓度为20%的胎牛血清，并且在培养基中制作细胞悬液。在培养瓶中充入95%的空气以及5%的二氧化碳，将经过上述步骤处理的细胞孵育，时间为90 min。完成该项操作后将含有心肌细胞的培养液进行转移处理，在另一个培养瓶中继续进行培养，前72 h内需要向其中加入浓度为0.1 mmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶，能够抑制非心肌细胞的增殖和分化。
根据caspase-3试剂盒操作，计算得到各组caspase-3 mRNA的相对含量。方法为RT-PCR(实时PCR扩增试验)，操作如下：首先提取总RNA，将抽提的总RNA按照模板进行合成。引物设计由深圳晶美生物工程有限公司完成并合成，然后配置20 μL PCR反应液，在95℃条件下热启动5 min，然后在95℃条件下水浴20 s ......
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根据caspase-3试剂盒操作，计算得到各组caspase-3 mRNA的相对含量。方法为RT-PCR(实时PCR扩增试验)，操作如下：首先提取总RNA，将抽提的总RNA按照模板进行合成。引物设计由深圳晶美生物工程有限公司完成并合成，然后配置20 μL PCR反应液，在95℃条件下热启动5 min，然后在95℃条件下水浴20 s ......
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