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编号:13004666
构建PDCD5基因真核表达载体及电转染BGC823细胞的研究(1)
http://www.100md.com 2017年2月25日 《中国现代医生》 2017年第6期
构建PDCD5基因真核表达载体及电转染BGC823细胞的研究,pcDNA3.1+表达载体,BGC823细胞系
     [摘要] 目的 构建PDCD5基因真核表达载体,并电转染BGC823细胞,获得稳定转染细胞。 方法 设计合成PDCD5基因片段,将其插入经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3.1+表达载体,菌落PCR和基因测序进行鉴定。重组质粒电转染BGC823细胞,G418筛选数周后PCR鉴定稳定转染细胞。 结果 重组质粒经菌落PCR测序分析表明,PDCD5基因序列准确插入预期位置,且序列正确。重组质粒成功电转染BGC823细胞,并整合入细胞基因组DNA。结论 成功构建了PDCD5基因真核表达载体,并整合进BGC823细胞基因组,为研究PDCD5基因的功能及胃癌的基因治疗提供实验基础。

    [关键词] PDCD5基因;pcDNA3.1+表达载体;电转染;BGC823细胞系

    [中图分类号] R394 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2017)06-0033-03

    [Abstract] Objective To construct eukaryotic expression vector of PDCD5 gene and transfect BGC823 cells to obtain stable transfected cells. Methods The PDCD5 gene fragment was designed and inserted into pcDNA3.1+ expression vector which was digested with EcoR Ⅰ and Xho Ⅰ. Colony PCR and sequencing were used for identification. The recombinant plasmid was electrically transfected into BGC823 cells ......
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