1.3.3 蛋白酶K法 取单头螨体样品放入0.2 mL离心管中，加入30 μL的STE研磨缓冲液，用烧溶后的枪头将螨体充分研磨后，用30 μL STE研磨缓冲液清洗枪头，加入蛋白酶K(200 μg/mL)，研磨液56 ℃消化1～2 h，消化后的产物95 ℃ 保温45 s，2000～3000 r/min离心30 s，上清液作为做PCR反应的模板[11]。

    1.4 PCR反应 PCR反应体系(27 μL)：10×Buffer (Mg2+Free) 2.5 μL，mg2+ 2.0 μL，dNTP Mixture 0.2 μL，正反引物(10 pmo1)各0.5 μL，Taq酶0.5 μL，加双蒸水至27 μL。PCR扩增条件如下：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，运行35个循环。72 ℃后延伸10 min。

    1.5 PCR反应产物检测 每个样本取5 μL PCR产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳(90 V，40 min)，结果用凝胶电泳成像分析系统拍照。

    2 结果

    COⅠ基因PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测结果显示：酚氯仿法未能从单头螨中提取到有效DNA ......