几种单头螨线粒体基因组提取方法的比较(3)
Chelex-100是一种由苯乙烯和苯二乙烯组成的一种金属离子螯合剂，可高选择性地去除样品和缓冲液中的金属离子，避免煮沸过程中模板DNA的降解。被广泛应用于医学微量血痕DNA以及微生物DNA提取[23-24]。与经典的酚氯仿抽提法相比，Chelex-100法未用苯酚除蛋白质，也未用乙醇沉淀DNA，所以DNA中仍混有少许蛋白质，但PCR反应对模板纯度的要求较低，其结果是稳定可靠的，其特异性和敏感性可与酚氯仿法相媲美[25]。Chelex-100法与传统的酚氯仿抽提法比较，省去了复杂的抽提纯化过程，节省了时间。此外本法单头螨即可获得可用于PCR反应的模板量，而酚氯仿抽提法在抽提纯化过程中DNA损失量较大，无法从微量样品中得到目的DNA。再者，Chelex-100试剂无毒，而酚和氯仿对人体有一定的毒性[26]。
蛋白酶K法直接用蛋白酶K消化被充分研磨的极微量样品，从而得到适合于PCR反应的DNA模板。因所需的样品量极微小，所得的PCR产物经进一步纯化后可以达到较高的纯度，适用于RAPD、RFLP、序列测定、克隆等试验。该方法除具备Chelex-100法的优点外，成本较Chelex-100法低廉，而且提取效率高，但是所获得的模板量较Chelex-100法少。综合Chelex-100法和蛋白酶K法各自的优缺点，当需要大量模板时可使用Chelex-100法，而只需要获得少量模板可采用蛋白酶K经济、快捷。
, 百拇医药
本实验采用活体的螨类标本，而对于不同保存方法和不同保存时间的螨类标本，上述3种方法的取提效果还有待进一步的研究。
参考文献
[1]李朝品，武前文.房舍和储藏物粉螨[M].合肥：中国科技大学出版社，1996：267-271.
[2]休斯 A M.贮藏食物与房舍的螨类[M].忻介六，沈兆鹏，译.北京：农业出版社，1983：194-215.
[3]黄斌，王朋朋，吴淑庄，等.血清尘螨特异性IgE检测在小儿哮喘防治中的应用研究[J].中国医学创新，2014，11(7)：25-26.
[4]陈国华，刘婧，付承，等.粉尘螨滴剂治疗尘螨过敏性支气管哮喘疗效观察[J].中外医学研究，2014，12(23)：105-107.
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[5] Bains P，Dogra A.Skin prick test in patients with chronic allergic skin disorders[J].Indian J Dermatol，2015，60(2)：159-164.
[6] Palopoli M F，Minot S，Pei D，et al.Complete mitochondrial genomes of the human follicle mites Demodex brevis and D.folliculorum：novel gene arrangement，truncated tRNA genes，and ancient divergence between species[J].BMC Genomics，2014，16(15)：1124.
[7] Halász J，Kodad O，Heged?s A.Identification of a recently active Prunus-specific non-autonomous Mutator element with considerable genome shaping force[J].Plant J，2014，79(2)：220-231.
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[8]吴太葆.基于形态特征和 COI 基因的粉螨重要类群系统发育研究 (蜱螨亚纲：粉螨亚目)[D].南昌：南昌大学，2007.
[9]邹志文，张素卿，辛天蓉，等.一种简易的昆虫基因组DNA提取方法[J].南昌大学学报(理科版)，2011，35(6)：564-567.
[10]田英芳，黄刚，郑哲民，等.一种简易的昆虫基因组DNA提取方法[J].陕西师范大学学报(自然科学版)，1999，27(4)：82-84.
[11]温硕洋，何晓芳.一种适用于昆虫痕量DNA 模板制备的方法[J].昆虫知识，2003，40(3)：276-279.
[12] Gissi C，Iannelli F，Pesole G.Evolution of the mitochondrial genome of Metazoa as exemplified by comparison of congeneric species[J].Heredity，2008，101(4)：301-320.
, 百拇医药
[13] Wang I J.Recognizing the temporal distinctions between landscape genetics and phylogeography[J].Mol Ecol，2010，19(13)：2605-2608.
[14] Nabholz B，Jarvis E D，Ellegren H.Obtaining mtDNA genomes from next generation transcriptome sequencing：a case study on the basal Passerida (Aves：Passeriformes) phylogeny[J].Mol Phylogenet Evol.，2010，57(1)：466-470.
[15] Masta S E.Mitoehondrial rRNA secondary structures and genome arangements distinguish chelicerates：comparisons with a harvestman (Arachnida：Opiliones：Phalangium opilio)[J].Gene，2010，449(1-2)：9-21., 百拇医药(湛孝东 李朝品 席贻龙)
蛋白酶K法直接用蛋白酶K消化被充分研磨的极微量样品，从而得到适合于PCR反应的DNA模板。因所需的样品量极微小，所得的PCR产物经进一步纯化后可以达到较高的纯度，适用于RAPD、RFLP、序列测定、克隆等试验。该方法除具备Chelex-100法的优点外，成本较Chelex-100法低廉，而且提取效率高，但是所获得的模板量较Chelex-100法少。综合Chelex-100法和蛋白酶K法各自的优缺点，当需要大量模板时可使用Chelex-100法，而只需要获得少量模板可采用蛋白酶K经济、快捷。
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本实验采用活体的螨类标本，而对于不同保存方法和不同保存时间的螨类标本，上述3种方法的取提效果还有待进一步的研究。
参考文献
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