软骨细胞复合纤维蛋白胶植入修复兔关节软骨缺损的效果研究(2)
1.2.5 分组 将已经编号的40只大兔分为实验组和对照组。实验组兔膝关节软骨缺损区植入含有软骨细胞和纤维蛋白复合物，空白对照组不做任何植入处理。分别在第4、8、12周进行处死取材，用10%体积分数的甲醛固定，30%甲酸脱钙，石蜡进行包埋然后制备成4 μm的切片。
1.3 观察项目 苏木精-伊红染色和大体实验观察修复组织学的效果，用甲苯胺蓝染色观察修复后透明软骨形成情况。
2 结果
2.1 实验观察情况 所用实验兔膝关节活动正常，关节无粘连现象、没有发现滑膜增生和关节游离，显示关节液清亮。实验组4～8周，半透明、软骨样组织替代缺损，并且边界模糊，表面光滑。对照组4～8周发现色泽比较灰暗，表面出现凹凸不平，在12周时出现虫蚀样，创面边界模糊不清。
2.2 组织学结果 造模12周后用苏木精-伊红对两组切片进行染色，结果实验组修复的组织透明，软骨厚度接近正常，与周围软骨结合较完好，有梭型纤维样的细胞在表层出现，软骨有陷窝，深层的软骨已经出现钙化和底层的软骨紧密结合。对照组缺损的软骨部位只生成少量纤维组织，经过修复的地方比较薄。
, 百拇医药
2.3 甲苯胺蓝染色情况 造模12周后对两组切片进行甲苯胺蓝染色。实验组染色为阳性，缺损处于周围正常组织界限不清晰。空白对照组切片的甲苯胺蓝染色结果为阴性。
3 讨论
如何找到合适的载体为修复的主要任务。理想的载体应该具备以下几个优点：(1)与宿主细胞有良好相容性；(2)有理想三维结构；(3)具有良好可塑性，可以将其制备成所需形状；(4)有生物降解性质[5-7]。传统的载体选择一般都为商品化的人纤维蛋白胶，但是在美国因为考虑疾病的传播而被限制使用。硫酸铵沉淀法是比较简便的一种制备纤维蛋白原的方法，并且可以避免疾病传播。在本次的使用中发现其具有较理想的实用性。
在本次的研究中，来自本身的软骨细胞和生物蛋白胶复合，对于软骨损伤的修复有理想的效果，明显优于对照组。但是在苏木精-伊红和甲苯胺蓝的颜色中显示，以纤维软骨为主的修复，所以不能完全替代原来透明软骨的功能。在甲苯胺蓝染色结果中，缺损的细胞还具有相关活性。有数据报道，自体软骨细胞在移植过程中细胞可以不用扩散而达到和体外扩增相当的修复效果[8]。
, 百拇医药
近年来也有报道使用自体软骨细胞修复关节缺损并取得良好效果的报道[9-10]。从本次试验结果来看，运用自体软骨组织病理病理切片等均显示修复效果良好。因此笔者认为，软骨细胞复合纤维蛋白可以很好地修复关节软骨的缺损，可以考虑用于再生修复软骨的缺损。
参考文献
[1]李钦宗，信金党.关节镜下微骨折术修复关节软骨缺损的研究进展[J].中国内镜杂志，2015，21(2)：166-170.
[2] Chesterman P J， Smith A U. Homotrasplantation of articular cartilage and isolated chondrocytes. An experimental study in rabbits[J]. J Bone Joint Surg Br，1968，50(1)：184-197.
, 百拇医药
[3]綦惠，孙磊，陈磊，等.脱钙骨基质与生物蛋白胶复合载体修复兔关节软骨缺损[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(25)：4589-4593.
[4]傅捷，吴海山，周维江，等.软骨细胞纤维蛋白胶混合物修复兔关节软骨缺损的实验研究[J].第二军医大学学报，2000，21(7)：673-675.
[5] Vinater C， Mrugala D， Jorgensen C， et al. Cartilge engineering： a crucial combination of cells， biomaterials and biofactors[J]. Trends Biotechnol，2009，27(5)：307-314.
[6]王秋玲，吕玉明.组织工程修复骨及软骨缺损的现状及展望[J].中国组织工程研究与临床康复，2009，13(37)：7358-7362.
, http://www.100md.com
[7]王德芳，乔广艳，刘莉.软骨细胞与复合水凝胶的生物相容性研究[J].上海交通大学学报，2012，3(11)：1465-1466.
[8]傅捷，董肇阳，祝云利，等.关节软骨细胞的分离、培养及表皮细胞生长因子对其影响[J].第二军医大学学报，2000，21(7)：677-679.
[9]王秋玲，吕玉明.组织工程修复骨及软骨缺损的现状及展望[J].中国组织工程研究与临床康复，2009，13(37)：7358-7362.
[10]胡志俊，胡波，唐德志，等.兔膝关节软骨细胞的分离培养及形态学特征[J].中国组织工程研究与临床康复，2012，14(46)：8555-8556.
(收稿日期：2015-06-30) (本文编辑：王宇), 百拇医药(张桂友 林宇雨 杨戈 聂建雄 谭享业 贾春媛 许朋 黄菊兰)
1.3 观察项目 苏木精-伊红染色和大体实验观察修复组织学的效果，用甲苯胺蓝染色观察修复后透明软骨形成情况。
2 结果
2.1 实验观察情况 所用实验兔膝关节活动正常，关节无粘连现象、没有发现滑膜增生和关节游离，显示关节液清亮。实验组4～8周，半透明、软骨样组织替代缺损，并且边界模糊，表面光滑。对照组4～8周发现色泽比较灰暗，表面出现凹凸不平，在12周时出现虫蚀样，创面边界模糊不清。
2.2 组织学结果 造模12周后用苏木精-伊红对两组切片进行染色，结果实验组修复的组织透明，软骨厚度接近正常，与周围软骨结合较完好，有梭型纤维样的细胞在表层出现，软骨有陷窝，深层的软骨已经出现钙化和底层的软骨紧密结合。对照组缺损的软骨部位只生成少量纤维组织，经过修复的地方比较薄。
, 百拇医药
2.3 甲苯胺蓝染色情况 造模12周后对两组切片进行甲苯胺蓝染色。实验组染色为阳性，缺损处于周围正常组织界限不清晰。空白对照组切片的甲苯胺蓝染色结果为阴性。
3 讨论
如何找到合适的载体为修复的主要任务。理想的载体应该具备以下几个优点：(1)与宿主细胞有良好相容性；(2)有理想三维结构；(3)具有良好可塑性，可以将其制备成所需形状；(4)有生物降解性质[5-7]。传统的载体选择一般都为商品化的人纤维蛋白胶，但是在美国因为考虑疾病的传播而被限制使用。硫酸铵沉淀法是比较简便的一种制备纤维蛋白原的方法，并且可以避免疾病传播。在本次的使用中发现其具有较理想的实用性。
在本次的研究中，来自本身的软骨细胞和生物蛋白胶复合，对于软骨损伤的修复有理想的效果，明显优于对照组。但是在苏木精-伊红和甲苯胺蓝的颜色中显示，以纤维软骨为主的修复，所以不能完全替代原来透明软骨的功能。在甲苯胺蓝染色结果中，缺损的细胞还具有相关活性。有数据报道，自体软骨细胞在移植过程中细胞可以不用扩散而达到和体外扩增相当的修复效果[8]。
, 百拇医药
近年来也有报道使用自体软骨细胞修复关节缺损并取得良好效果的报道[9-10]。从本次试验结果来看，运用自体软骨组织病理病理切片等均显示修复效果良好。因此笔者认为，软骨细胞复合纤维蛋白可以很好地修复关节软骨的缺损，可以考虑用于再生修复软骨的缺损。
参考文献
[1]李钦宗，信金党.关节镜下微骨折术修复关节软骨缺损的研究进展[J].中国内镜杂志，2015，21(2)：166-170.
[2] Chesterman P J， Smith A U. Homotrasplantation of articular cartilage and isolated chondrocytes. An experimental study in rabbits[J]. J Bone Joint Surg Br，1968，50(1)：184-197.
, 百拇医药
[3]綦惠，孙磊，陈磊，等.脱钙骨基质与生物蛋白胶复合载体修复兔关节软骨缺损[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(25)：4589-4593.
[4]傅捷，吴海山，周维江，等.软骨细胞纤维蛋白胶混合物修复兔关节软骨缺损的实验研究[J].第二军医大学学报，2000，21(7)：673-675.
[5] Vinater C， Mrugala D， Jorgensen C， et al. Cartilge engineering： a crucial combination of cells， biomaterials and biofactors[J]. Trends Biotechnol，2009，27(5)：307-314.
[6]王秋玲，吕玉明.组织工程修复骨及软骨缺损的现状及展望[J].中国组织工程研究与临床康复，2009，13(37)：7358-7362.
, http://www.100md.com
[7]王德芳，乔广艳，刘莉.软骨细胞与复合水凝胶的生物相容性研究[J].上海交通大学学报，2012，3(11)：1465-1466.
[8]傅捷，董肇阳，祝云利，等.关节软骨细胞的分离、培养及表皮细胞生长因子对其影响[J].第二军医大学学报，2000，21(7)：677-679.
[9]王秋玲，吕玉明.组织工程修复骨及软骨缺损的现状及展望[J].中国组织工程研究与临床康复，2009，13(37)：7358-7362.
[10]胡志俊，胡波，唐德志，等.兔膝关节软骨细胞的分离培养及形态学特征[J].中国组织工程研究与临床康复，2012，14(46)：8555-8556.
(收稿日期：2015-06-30) (本文编辑：王宇), 百拇医药(张桂友 林宇雨 杨戈 聂建雄 谭享业 贾春媛 许朋 黄菊兰)