软骨细胞复合纤维蛋白胶植入修复兔关节软骨缺损的效果研究(1)
【摘要】 目的：观察软骨细胞复合纤维蛋白胶植入修复兔关节软骨缺损的效果。方法：用硫酸铵沉淀法从兔血液中提取纤维蛋白并且制备纤维蛋白胶；建立兔关节软骨缺损模型，编号，将40只新西兰兔分为实验组及空白对照组，实验组植入复合物，空白对照组不进行任何植入处理。分别于术后4、8、12周取材料，进行大体、甲苯胺蓝以及组织学的观察，判断关节软骨细胞缺损的修复情况。结果：实验组实验12周时可以修复膝关节软骨的缺失，以透明的软骨组织为主，修复效果明显优于空白对照组。结论：软骨细胞复合纤维蛋白可以很好地修复关节软骨的缺损，可以考虑用于再生修复软骨的缺损。
【关键词】 纤维蛋白胶； 软骨缺损； 硫酸铵沉淀
【Abstract】 Objective：To observe the effect of the compound fibrin glue on repairing articular cartilage defect of rabbit.Method：The fibrin was extracted from rabbit blood by ammonium sulfate precipitation method and prepared fibrin glue.The defect model of rabbit articular cartilage was established，then numbered.The 40 New Zealand rabbits were divided into the experimental group and the blank control group，the experimental group was implanted composite，the blank control group without any implant treatment.The materials were taken respectively after 4，8，12 weeks，underwent the generally，toluidine blue staining and histological observation，the repair of articular cartilage defect was judged.Result：In the experimental group，the defect of the articular cartilage was repaired at 12 weeks，and the tissue of the cartilage was transparent，and the effect of the repair was better than that of the blank control group.Conclusion：Chondrocytes complex fibrin can be a good repair for articular cartilage defects，can be considered for the regeneration of cartilage defects.
, 百拇医药
【Key words】 Fibrin glue； Cartilage defects； Ammonium sulfate precipitation
First-author’s address： Zhongshan Sanxiang Hospital， Zhongshan 528463， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.35.006
、关节软骨缺损主要是由机械外伤或者炎症等原因造成，据研究数据显示关节软骨缺损的临床发生率大概为5%左右[1]。早在1968年Chestenman等[2]已经报道采用软骨细胞来修复关节软骨。为了能够使得植入的细胞很好地固定于关节软骨缺损处，需要一个比较合乎要求的移植载体。传统的载体选择一般都为商品化的人纤维蛋白胶，但是在美国考虑疾病的传播而被限制使用。硫酸铵沉淀法是比较简便的一种制备纤维蛋白原的方法，并且可以避免疾病传播。笔者在查阅相关文献时发现目前采用该方法制备纤维蛋白胶修复关节软骨缺损的报道较少，因此决定采用自体的软骨细胞符合纤维蛋白修复兔关节缺损，并收到比较理想实验结果，现将实验整理作如下报道。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验材料 凝血酶原购自杭州康恩贝公司，氯化钙以及枸橼酸钠为分析纯，40只新西兰兔购自上海医药工业研究所，体重范围2～3 kg，雌雄部分，随机分为实验组以及空白对照组，其余的药品参考綦惠等[3]报道中所用试剂。
1.2 方法
1.2.1 自体软骨细胞的分析和培养 对实验组的兔子进行编号，采用3%的异戊巴比妥经耳缘进行麻醉，在无菌的条件下削取右侧股骨滑车的关节软骨。
1.2.2 制备生物胶原蛋白 用A、B两种液体混合而成。凝血酶、Ca2+为A液主要成分，其中含有400 IU/mL的凝血酶和40 mmol/L的Ca2+。纤维蛋白、XⅢ因子是B液主要成分，含有60 g/L的纤维蛋白原以及30 U/mL的XⅢ因子。软骨细胞和纤维蛋白复合参考文献[4]的报道。
1.2.3 分离软骨细胞 取实验兔的膝关节股骨髁软骨组织。将其剪成块状，PBS冲洗，剪碎，离心，加入2% Ⅱ型胶原酶溶液，然后37 ℃、5% CO饱和溶液培育3 h，然后800 r/min，离心5 min，收集离心后的细胞、再用PBS冲洗3次。
1.2.4 模型制备 将大兔仰卧于手术台，3%的异戊巴比妥经耳缘进行麻醉，切口在膝外侧，在股骨外侧的髁关节面进行抽取软骨，直径为3 mm缺损做在关节平面，纵向钻入3 mm，直达骨髓腔。, http://www.100md.com(张桂友 林宇雨 杨戈 聂建雄 谭享业 贾春媛 许朋 黄菊兰)
【关键词】 纤维蛋白胶； 软骨缺损； 硫酸铵沉淀
【Abstract】 Objective：To observe the effect of the compound fibrin glue on repairing articular cartilage defect of rabbit.Method：The fibrin was extracted from rabbit blood by ammonium sulfate precipitation method and prepared fibrin glue.The defect model of rabbit articular cartilage was established，then numbered.The 40 New Zealand rabbits were divided into the experimental group and the blank control group，the experimental group was implanted composite，the blank control group without any implant treatment.The materials were taken respectively after 4，8，12 weeks，underwent the generally，toluidine blue staining and histological observation，the repair of articular cartilage defect was judged.Result：In the experimental group，the defect of the articular cartilage was repaired at 12 weeks，and the tissue of the cartilage was transparent，and the effect of the repair was better than that of the blank control group.Conclusion：Chondrocytes complex fibrin can be a good repair for articular cartilage defects，can be considered for the regeneration of cartilage defects.
, 百拇医药
【Key words】 Fibrin glue； Cartilage defects； Ammonium sulfate precipitation
First-author’s address： Zhongshan Sanxiang Hospital， Zhongshan 528463， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.35.006
、关节软骨缺损主要是由机械外伤或者炎症等原因造成，据研究数据显示关节软骨缺损的临床发生率大概为5%左右[1]。早在1968年Chestenman等[2]已经报道采用软骨细胞来修复关节软骨。为了能够使得植入的细胞很好地固定于关节软骨缺损处，需要一个比较合乎要求的移植载体。传统的载体选择一般都为商品化的人纤维蛋白胶，但是在美国考虑疾病的传播而被限制使用。硫酸铵沉淀法是比较简便的一种制备纤维蛋白原的方法，并且可以避免疾病传播。笔者在查阅相关文献时发现目前采用该方法制备纤维蛋白胶修复关节软骨缺损的报道较少，因此决定采用自体的软骨细胞符合纤维蛋白修复兔关节缺损，并收到比较理想实验结果，现将实验整理作如下报道。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验材料 凝血酶原购自杭州康恩贝公司，氯化钙以及枸橼酸钠为分析纯，40只新西兰兔购自上海医药工业研究所，体重范围2～3 kg，雌雄部分，随机分为实验组以及空白对照组，其余的药品参考綦惠等[3]报道中所用试剂。
1.2 方法
1.2.1 自体软骨细胞的分析和培养 对实验组的兔子进行编号，采用3%的异戊巴比妥经耳缘进行麻醉，在无菌的条件下削取右侧股骨滑车的关节软骨。
1.2.2 制备生物胶原蛋白 用A、B两种液体混合而成。凝血酶、Ca2+为A液主要成分，其中含有400 IU/mL的凝血酶和40 mmol/L的Ca2+。纤维蛋白、XⅢ因子是B液主要成分，含有60 g/L的纤维蛋白原以及30 U/mL的XⅢ因子。软骨细胞和纤维蛋白复合参考文献[4]的报道。
1.2.3 分离软骨细胞 取实验兔的膝关节股骨髁软骨组织。将其剪成块状，PBS冲洗，剪碎，离心，加入2% Ⅱ型胶原酶溶液，然后37 ℃、5% CO饱和溶液培育3 h，然后800 r/min，离心5 min，收集离心后的细胞、再用PBS冲洗3次。
1.2.4 模型制备 将大兔仰卧于手术台，3%的异戊巴比妥经耳缘进行麻醉，切口在膝外侧，在股骨外侧的髁关节面进行抽取软骨，直径为3 mm缺损做在关节平面，纵向钻入3 mm，直达骨髓腔。, http://www.100md.com(张桂友 林宇雨 杨戈 聂建雄 谭享业 贾春媛 许朋 黄菊兰)