中医药对神经内分泌免疫调节网络的研究(2)
(一)雌性大鼠不同月龄期下丘脑、垂体、卵巢ER及ErmR-NA的变化
取雌性大鼠14，21，28，35日龄，3月龄时性周期的4d和12，15，18，21~24月龄共12组在10：00~14：00放血处死，取下丘脑、垂体、卵巢于-70℃保存，测ER、ERmRNA及血E2水平。ER用放射配基结合分析法(HAP吸附分离)测定，ERmRNA以 ERcDNAα-32PdATP为探针，进行Northern blot分析。血E2在21日龄断乳后即下降，3月龄性成熟期明显上升，12月龄时明显下降(P<0.01＝，18月龄时又明显下降(P<0.05＝(图1)，下丘脑、垂体、卵巢的ER与ER mRNA出现相似变化，只是垂体的ER和ERmRNA水平在15月龄时明显下降(P<0.01＝。21~24月龄时又明显下降(P<0.01＝，在性周期中E2在动情前期E2水平高峰时，下丘脑ER及ERmRNA水平均降(图2，3，4)显示雌性大鼠一生中除动情前期外，血雌激素对下丘脑、垂和卵巢的ER，ERmRNA起正向调节作用，但这个作用在12月龄后性减退期较性成熟期明显减弱。
, http://www.100md.com
(二)"更年期"对老年雌性大鼠性腺车ER和ERmRNA及中枢递质的影响。
"更年健"复方：水煎成生药1g/ml，取性减退期15，18和21~24月龄雌性大鼠分别设EB组(隔日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.05μg/10g体重10次)，"更年健"组(按成人剂量/体表面积20倍，每日灌服"更年健"2ml，共20d)及C组(每日灌服生理盐水2ml，共20d)及C组(每日灌服生理盐水2ml，共20d)，第20日放血处死，用放射免疫法测血E2、T、β-内啡肽(β-EP)、P物质(SP)水平，用上节描述法测下丘脑、垂体、卵巢的ER及ERmRNA水平。另部分下丘脑煮沸5min，加抑肽酶保护，待测β-EP或0.1MnaAC保存待测SP(均用放射免疫法)。各组取大鼠6只1.5%巴比妥钠麻醉 后，4%甲醛PBS灌流，取脑作冰冻片，以到免疫组化法及时性计算机图像分析测中缝背核5-羟色胺(5-HT)。结果与C组相比，EB组3个月龄点血E2水平和E2/T明显上升(P<0.01)，血T水平下降(P<0.05)，下丘脑、垂体、卵巢ER及ERmRNA水平均明显下降(P<0.01)"更年健"组3个月龄点血 E2水平无明显变化(P>0.05)，血T水平则均下降(P<0.05)，E2/T水平亦明显上升(P<0.05)，15月龄不丘脑ErmRN水平上升(P<0.01)，但ER无明显变化(P>0.05)，垂体ER及ERmRNA均上升(P<0.01)，卵巢ER及ERmRNA水平无明显变化。18月龄点下丘脑、垂体和卵巢的ER及ERmRNA水平均明显下升(P<0.01)，21~24月龄则无明显影响(图1，2)，与C组相比EB组和"更年健"组在3个月龄点下丘脑及血β-EP均升高(P<0.05)，SP除21~24月龄点外均下降(P<0.05)，"更年健"组下丘脑 SP与ERmRNA呈负相关(r= -0.5942, P<0.05)，与血E2水平无相关性(r=0.03，P>0.05)，下丘脑β-EP与ERmRNA呈正相关(r=0.5526, P<0.05)与血E2水平无相关性(r=0.04, P<0.05)，EB组下丘脑SP与血E2水平呈负相关(r=-0.543, P<0.05)，下丘脑β-EP与E2水平呈正相关(r=0.6571, P<0.05)。EB组与"更年健"组3个月龄点中缝背核5-HT神经元均显著增加(P<0.01)。, 百拇医药(俞瑾)
取雌性大鼠14，21，28，35日龄，3月龄时性周期的4d和12，15，18，21~24月龄共12组在10：00~14：00放血处死，取下丘脑、垂体、卵巢于-70℃保存，测ER、ERmRNA及血E2水平。ER用放射配基结合分析法(HAP吸附分离)测定，ERmRNA以 ERcDNAα-32PdATP为探针，进行Northern blot分析。血E2在21日龄断乳后即下降，3月龄性成熟期明显上升，12月龄时明显下降(P<0.01＝，18月龄时又明显下降(P<0.05＝(图1)，下丘脑、垂体、卵巢的ER与ER mRNA出现相似变化，只是垂体的ER和ERmRNA水平在15月龄时明显下降(P<0.01＝。21~24月龄时又明显下降(P<0.01＝，在性周期中E2在动情前期E2水平高峰时，下丘脑ER及ERmRNA水平均降(图2，3，4)显示雌性大鼠一生中除动情前期外，血雌激素对下丘脑、垂和卵巢的ER，ERmRNA起正向调节作用，但这个作用在12月龄后性减退期较性成熟期明显减弱。
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(二)"更年期"对老年雌性大鼠性腺车ER和ERmRNA及中枢递质的影响。
"更年健"复方：水煎成生药1g/ml，取性减退期15，18和21~24月龄雌性大鼠分别设EB组(隔日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.05μg/10g体重10次)，"更年健"组(按成人剂量/体表面积20倍，每日灌服"更年健"2ml，共20d)及C组(每日灌服生理盐水2ml，共20d)及C组(每日灌服生理盐水2ml，共20d)，第20日放血处死，用放射免疫法测血E2、T、β-内啡肽(β-EP)、P物质(SP)水平，用上节描述法测下丘脑、垂体、卵巢的ER及ERmRNA水平。另部分下丘脑煮沸5min，加抑肽酶保护，待测β-EP或0.1MnaAC保存待测SP(均用放射免疫法)。各组取大鼠6只1.5%巴比妥钠麻醉 后，4%甲醛PBS灌流，取脑作冰冻片，以到免疫组化法及时性计算机图像分析测中缝背核5-羟色胺(5-HT)。结果与C组相比，EB组3个月龄点血E2水平和E2/T明显上升(P<0.01)，血T水平下降(P<0.05)，下丘脑、垂体、卵巢ER及ERmRNA水平均明显下降(P<0.01)"更年健"组3个月龄点血 E2水平无明显变化(P>0.05)，血T水平则均下降(P<0.05)，E2/T水平亦明显上升(P<0.05)，15月龄不丘脑ErmRN水平上升(P<0.01)，但ER无明显变化(P>0.05)，垂体ER及ERmRNA均上升(P<0.01)，卵巢ER及ERmRNA水平无明显变化。18月龄点下丘脑、垂体和卵巢的ER及ERmRNA水平均明显下升(P<0.01)，21~24月龄则无明显影响(图1，2)，与C组相比EB组和"更年健"组在3个月龄点下丘脑及血β-EP均升高(P<0.05)，SP除21~24月龄点外均下降(P<0.05)，"更年健"组下丘脑 SP与ERmRNA呈负相关(r= -0.5942, P<0.05)，与血E2水平无相关性(r=0.03，P>0.05)，下丘脑β-EP与ERmRNA呈正相关(r=0.5526, P<0.05)与血E2水平无相关性(r=0.04, P<0.05)，EB组下丘脑SP与血E2水平呈负相关(r=-0.543, P<0.05)，下丘脑β-EP与E2水平呈正相关(r=0.6571, P<0.05)。EB组与"更年健"组3个月龄点中缝背核5-HT神经元均显著增加(P<0.01)。, 百拇医药(俞瑾)