人体疟原虫镜检技术.ppt
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参见附件(2210kb)。
人体疟原虫镜检技术
沈毓祖
安徽省疾病预防控制中心
一、概述
疟原虫属原生动物亚界的真核单细胞动物。在生物界的位置：疟原虫为原生动物门、孢子纲、血孢子目、疟原虫科、疟原虫属。疟原虫有149种，目前公认的自然界感染人体的疟原虫只有四种：即间日疟(Pv)、恶性疟(Pf)、三日疟(Pm)、蛋形疟(PO)四种。
二、疟原虫生活史
1、红细胞外期
2、红细胞内期
3、子孢子增殖期
周围血液中各种血细胞的形态
薄血膜间日疟环状体
薄血膜间日疟环状体
恶性疟薄血膜环状体
薄血膜恶性疟环状体
薄血膜恶性疟环状体
薄血膜间日疟滋养体
薄血膜间日疟滋养体
薄血膜间日疟未成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜配子体
薄血膜配子体
恶性疟配子体
恶性疟配子体
恶性疟配子体
2、厚血膜上疟原虫形态特征
2.1环状体(R)
2.1.1间日疟环状体
2.1.2恶性疟环状体
2.2滋养体(T)
2.2.1间日疟滋养体
2.2.2恶性疟滋养
2.3早期裂埴体(早S)
2.3.1间日疟裂埴体
2.3.2恶性疟裂埴体
2.4晚期裂埴体
2.4.1间日疟晚期裂埴体
2.4.2恶性疟晚期裂埴体
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟滋养体
厚血膜恶性疟配子体
厚血膜恶性疟环状体
2.5配子体(G)
2.5.1间日疟配子体
2.5.1.1完整的配子体
2.5.1.2浆裂断收缩，核与色素如常
2.5.1.3浆已腐蚀消失，仅有核与色素
2.5.1.4核消失，仅有浆与色素
2.5.l.5核浆均已消失。仅有色素颗粒，以其沿边分布 的特点即可确认
2.5.2恶性疟配子体
2.5.2.1正常配子体
2.5.2.2圆形配子体
2.5.2.3梭形(枪形)配子体
2.5.2.4腐蚀的配子体
四、疟原虫与其它物体的鉴别
1、疑似疟色素
2、疑似疟原虫核
3、疑似原虫胞浆
4、白细胞的破碎残骸
5、幼红细胞残骸
五、镜检工作所需注意的事项
1、在镜检中显微镜的使用：油镜、凹镜、视野需按一宝顺序逐个检查。
2、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。
3、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、阳性片保存待考核。
4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性。
5、如发现恶性疟以嘴快的通信方法，在24小时内报县、市、省疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。
六、血片制作与染色
1、血片的清洁
新的载皮片必须洗洁净后才可直接浸于 9 5%的酒精中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。
用过的载玻片可用5%之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于 95%酒精内脱脂，照上述法处理，亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。
采血的部位和方法
* 以耳垂采血为主。
* 以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦掉，即可应用。(若由指头取血则受检者痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。)
采血的血量
* 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成边缘光滑之园形，直径约0.8-1.0厘米左右。
* 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约2厘米
采血的时间
* 进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要检查很多居民，故一般无法考虑取血的时间。
* 但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情况下。
采血的时间---间日疟
* 间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。虽在-般情况下，随便什么时间检查感染者的末稍血液,多少能查到各个时期的原虫，但适当的取血时间，一般是在患者发作数小时至十余小时，即已滋养发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期.
采血的时间---恶性疟
* 恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的 ......
人体疟原虫镜检技术
沈毓祖
安徽省疾病预防控制中心
一、概述
疟原虫属原生动物亚界的真核单细胞动物。在生物界的位置：疟原虫为原生动物门、孢子纲、血孢子目、疟原虫科、疟原虫属。疟原虫有149种，目前公认的自然界感染人体的疟原虫只有四种：即间日疟(Pv)、恶性疟(Pf)、三日疟(Pm)、蛋形疟(PO)四种。
二、疟原虫生活史
1、红细胞外期
2、红细胞内期
3、子孢子增殖期
周围血液中各种血细胞的形态
薄血膜间日疟环状体
薄血膜间日疟环状体
恶性疟薄血膜环状体
薄血膜恶性疟环状体
薄血膜恶性疟环状体
薄血膜间日疟滋养体
薄血膜间日疟滋养体
薄血膜间日疟未成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜间日疟成熟裂殖体
薄血膜配子体
薄血膜配子体
恶性疟配子体
恶性疟配子体
恶性疟配子体
2、厚血膜上疟原虫形态特征
2.1环状体(R)
2.1.1间日疟环状体
2.1.2恶性疟环状体
2.2滋养体(T)
2.2.1间日疟滋养体
2.2.2恶性疟滋养
2.3早期裂埴体(早S)
2.3.1间日疟裂埴体
2.3.2恶性疟裂埴体
2.4晚期裂埴体
2.4.1间日疟晚期裂埴体
2.4.2恶性疟晚期裂埴体
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟原虫形态
厚血膜间日疟滋养体
厚血膜恶性疟配子体
厚血膜恶性疟环状体
2.5配子体(G)
2.5.1间日疟配子体
2.5.1.1完整的配子体
2.5.1.2浆裂断收缩，核与色素如常
2.5.1.3浆已腐蚀消失，仅有核与色素
2.5.1.4核消失，仅有浆与色素
2.5.l.5核浆均已消失。仅有色素颗粒，以其沿边分布 的特点即可确认
2.5.2恶性疟配子体
2.5.2.1正常配子体
2.5.2.2圆形配子体
2.5.2.3梭形(枪形)配子体
2.5.2.4腐蚀的配子体
四、疟原虫与其它物体的鉴别
1、疑似疟色素
2、疑似疟原虫核
3、疑似原虫胞浆
4、白细胞的破碎残骸
5、幼红细胞残骸
五、镜检工作所需注意的事项
1、在镜检中显微镜的使用：油镜、凹镜、视野需按一宝顺序逐个检查。
2、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。
3、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、阳性片保存待考核。
4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性。
5、如发现恶性疟以嘴快的通信方法，在24小时内报县、市、省疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。
六、血片制作与染色
1、血片的清洁
新的载皮片必须洗洁净后才可直接浸于 9 5%的酒精中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。
用过的载玻片可用5%之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于 95%酒精内脱脂，照上述法处理，亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。
采血的部位和方法
* 以耳垂采血为主。
* 以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦掉，即可应用。(若由指头取血则受检者痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。)
采血的血量
* 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成边缘光滑之园形，直径约0.8-1.0厘米左右。
* 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约2厘米
采血的时间
* 进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要检查很多居民，故一般无法考虑取血的时间。
* 但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情况下。
采血的时间---间日疟
* 间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。虽在-般情况下，随便什么时间检查感染者的末稍血液,多少能查到各个时期的原虫，但适当的取血时间，一般是在患者发作数小时至十余小时，即已滋养发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期.
采血的时间---恶性疟
* 恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的 ......
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