C h i nJ C l i nN e u r o s u r g , J a n2 0 0 8 , V o l 1 3 , N o1

    【 摘要】目的 探讨大鼠胚胎神经干细胞( N S C ) 的体外培养和诱导分化的条件和特点。 方法 从孕 1 4 ~ 1 6d的大鼠胚胎脑皮质

    中分离 N S C , 在表皮生长因子、 碱性成纤维生长因子和 B 2 7联合作用下使其稳定增殖, 并用 1 0 %的胎牛血清诱导其贴壁分化, 应

    用免疫荧光染色方法行巢蛋白( N e s t i n ) 、 神经元特异性烯醇化酶( N S E ) 、 胶质纤维酸性蛋白( G F A P ) 、 G a l c - C免疫荧光染色, 对

    N S C及其分化的细胞进行鉴定。结果 体外培养的 N S C增殖成神经干细胞球并传代, 鉴定为 N e s t i n染色阳性细胞, 并可诱导分化

    为神经元细胞( N S E染色阳性细胞) 、 星形胶质细胞( G F A P染色阳性细胞) 和少突胶质细胞( G a l c - C染色阳性细胞) 。结论 采用无

    血清培养基中加入特定生长因子的培养技术, 可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的大鼠胚胎 N S C 。

    【 关键词】神经干细胞; 分化; 鉴定; 免疫荧光; 培养; 大鼠

    【 文章编号】1 0 0 9 - 1 5 3 X ( 2 0 0 8 ) 0 1 - 0 0 3 2 - 0 3 【 文献标识码】A 【 中图分类号】Q8 1 3 . 1 + 1

    C u l t u r ea n dI d e n t i f i c a t i o no f R a t E mb r y oN e u r a l S t e mC e l l s I nV i t r o

    WA N GX i a o - f e n g , L I S h u a n - d e , L I UJ i a n - x i n . D e p a r t m e n t o f N e u r o s u r g e r y , T h e3 r dH o s p i t a l , P L A , B a o j i S h a n x i 7 2 1 0 0 4 , C h i n a

    【 A b s t r a c t 】 Ob j e c t i v eT oe x p l o r et h ec o n d i t i o n so fc u l t u r i n gr a te m b r y on e u r a ls t e mc e l l si nv i t r oa n dt h e i ri d e n t i f i c a t i o n .

    Me t h o d sT h en e u r a l s t e mc e l l sw e r ed e r i v e df r o mt h ec o r t e xt i s s u eo f r a t e m b r y oa t t h ea g eo f 1 4 ～ 1 6d a y sa n dp r o l i f e r a t e ds t e a d i l y

    u n d e r t h ee f f e c t o f e p i d e r m a t g r o w t hf a c t o r( E G F ) ,b a s i cf i b r o b l a s t g r o w t hf a c t o r( b F G F )a n dB 2 7 .T h er a t n e u r a l s t e mc e l l s p h e r e

    d i f f e r e n t i a t i o nw a s i n d u c e db y1 0 %f e t a l c a l f s e r u m .T h er a t n e u r a l s t e mc e l l s a n dt h ed i f f e r e n t i a t e dn e u r a l s t e mc e l l s w e r ei d e n t i f i e d

    r e s p e c t i v e l yb yi m m u n o f l u o r e s c e n c ei n c l u d i n gN e s t i n , n e u r o ns p e c i f i ce n o l a s e( N S E ) , g i l i a l f i b r i l l a r ya c i d i cp r o t e i n( G F A P ) a n dG a l c - C .

    R e s u l t sT h ec u l t u r e dn e u r a l s t e mc e l l sp r o l i f e r a t e d ,a n db e c o m et h es p h e r e .T h er a t n e u r a l s t e mc e l l sa f t e r t h ec u l t u r ea n dp a s s a g e

    w e r ep r o v e db yp o s i t i v eN e s t i n . T h ed i f f e r e n t i a t e dc e l l si nt h es p h e r ec o u l de x p r e s ss p e c i f i ca n t i g e n so f n e u r o n s ( p o s i t i v eN S E ) ,a s t r o c y t e s ( p o s i t i v eG F A P ) a n do l i g o d e n d r o c y t e ( p o s i t i v eG a l c - C ) . C o n c l u s i o nWi t ht h eh e l po fg r o w t hf a c t o r sa n ds e r u m- f r e e

    t e c h n i q u e , t h er a t n e u r a l s t e mc e l l s w h i c hh a v ep o t e n c yo f m u l t i p l ed i f f e r e n t i a t i o n s c a ns u c c e s s f u l l yb ec u l t u r e di nv i t r o .

    【 Ke yWo r d s 】N e u r a l s t e mc e l l s ; D i f f e r e n t i a t i o n ; I n d e n t i f i c a t i o n ; I m m u n o f l u o r e s c e n c e ; C u l t u r e ; R a t

    大鼠胚胎神经干细胞的体外培养及鉴定

    王晓峰 李拴德 刘建新

    ● 实验研究●

    神经干细胞( n e u r a l s t e mc e l l , N S C ) 是具有自我

    复制能力和多向分化能力的未分化神经系统细胞 ......