邻苯二甲酸二丁酯诱导尿道下裂大鼠模型的建立及其作用机制.PDF
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参见附件(99kb)。
·动物模型·
邻苯二甲酸二丁酯诱导尿道下裂
大鼠模型的建立及其作用机制
张炜 袁琳 吴婷 贺厚光 龚永光 王心如
基金项目: 国家 973 计划课题资助项目 ( 2002CB512908 ,2001CCA04900)
作者单位:210029 南京医科大学第一附属医院泌尿外科(张炜、袁 琳、吴婷、贺厚光、龚永光) ;南京医科大学公共卫生学院(王心如)
【摘要】 目的 用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其
导致尿道下裂的作用机制。方法 将孕鼠在怀孕第 12～19 天用 DBP (500 mg/ kg 体重)连续每天
灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型 ,并将孕鼠在第 19 天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织 ,用逆转录2
聚合酶链反应(RT2PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素 P450 胆固醇侧链裂解酶
(P450scc) 、 3 β羟基类固醇脱氢酶(3 β 2HSD)和细胞色素 P450 17 α 2羟化酶( P450c17)的 mRNA 含量
水平 ,与正常对照组进行比较。结果 DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中 P450scc、 3 β 2HSD和
P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降 ,两组间差异比较均有统计学意义
( P < 0. 05) 。结论 DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径 ,降低了
睾酮水平 ,导致大鼠出生后尿道下裂的出现。
【关键词】 邻苯二甲酸二丁酯; 尿道下裂; 逆转录2聚合酶链反应
Establ ishment of hypospadias rat model induced by Di ( n2butyl ) phthalate and the mechanism
ZHA N G Wei , YUA N L in , WU Ting , et al . Department of Urology , The Fi rst A f f il iated Hospi tal of
Nanjing Medical Universi ty , Nanjing 210029 ,China
【Abstract】 Objective To establish hypospadias rat model induced by Di ( n2butyl ) phthalate
(DBP) and study the mechanism. Methods Pregnant Sprague2Dawley rats were gavaged with DBP at
500 mg/ kg every day as DBP2exposed group on gestation days ( GD) 12219 to estabish hypospadias rat
model and testicular RNA isolated f rom three randomly selected GD 19 fetuses per lit ter was used for real 2
time RT2PCR for the following genes : P450 side2chain cleavage enzyme ( P450scc) ,3 β 2hydroxysteroid
dehydrogenase ( 3 β 2HSD) , cytochrome P450 17 α 2hydroxylase/ C172202lyase ( P450c17 ) . Results
P450scc ,3 β 2HSD and P450c17 in the DBP 2exposed fetal testes were evidently decreased as compared
with cont rol group ( P < 0. 05) . Conclusion DBP altered gene expression of the three enzymes in the
testicular testosterone ( T) biosynthetic pathway and decreased T production ,resulting in the occurrence
of hypospadias in rat .
【Key words】 Di (n2butyl) phthalate ; Hypospadias ; Reverse t ranscription2PCR
尿道下裂是小儿泌尿生殖系统最常见的畸形之
一 ,国外发病率为 0. 3 %[1 ]
,并有逐年上升趋势。目
前 ,尿道下裂的病因仍然不明 ,考虑是遗传和环境等多
种因素共同作用的结果。邻苯二甲酸酯类化合物
(AEs) 作为增塑剂、软化剂、载体及添加剂 ,广泛应用
于塑料、汽车、服装、农药和化妆品等行业 ,各国的年生
产量呈直线上升趋势 ,由于该类化合物的脂2水分配系
数高 ,在产品的生产加工过程中 , PAEs 并未能真正与
高分子碳链聚合 ,伴随塑料制品的生产、使用和废弃过
程 ,不断地被释放至环境中去 ,在环境中难以降解 ,进
而通过呼吸、饮食、饮水、使用化妆品等方式进入生物
体并造成危害。欧盟及美日等国均已将此类化合物列
为优先控制环境污染物。在我国 ,目前使用量最大的
增塑剂为邻苯二甲酸二丁酯(DBP) 。我们应用 DBP
诱导建立尿道下裂大鼠的动物模型 ,并用逆转录2聚合
酶链反应(RT2PCR)方法进一步研究DBP导致大鼠尿
道下裂的作用及其机制。
材料和方法
1.试剂:DBP(分析纯 ,浓度:1. 04 g/ ml) ,购自 Sig2
ma公司;市售精制大豆油; TRIzol、 RT2PCR 一步法成
套试剂盒、琼脂糖、 DNA Marker 购自 Promega 公司;
细胞色素 P450 胆固醇侧链裂解酶( P450scc) 、 3 β羟基
类固醇脱氢酶(3 β 2HSD) 、细胞色素 P450 17 α 2羟化酶
(P450c17)和 32磷酸甘油醛脱氢酶( GAPDH)的引物由
江苏百龙基因有限公司合成;氯仿、异丙醇、 75 %乙醇、DEPC水均为国产分析纯试剂。
2.实验动物:SPF级 Sprague2Dawley 大鼠 ,约8 周
· 642 · 中华实验外科杂志2005 年2 月第22 卷第2 期 Chin J Exp Surg ,February 2005 ,Vol 22 ,No. 2
? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.鼠龄 ,雌性 80 只 ,体重(220 ±20) g ,雄性 40 只 ,体重
(300 ±20) g ,购自南京医科大学动物实验中心 ......
邻苯二甲酸二丁酯诱导尿道下裂
大鼠模型的建立及其作用机制
张炜 袁琳 吴婷 贺厚光 龚永光 王心如
基金项目: 国家 973 计划课题资助项目 ( 2002CB512908 ,2001CCA04900)
作者单位:210029 南京医科大学第一附属医院泌尿外科(张炜、袁 琳、吴婷、贺厚光、龚永光) ;南京医科大学公共卫生学院(王心如)
【摘要】 目的 用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其
导致尿道下裂的作用机制。方法 将孕鼠在怀孕第 12～19 天用 DBP (500 mg/ kg 体重)连续每天
灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型 ,并将孕鼠在第 19 天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织 ,用逆转录2
聚合酶链反应(RT2PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素 P450 胆固醇侧链裂解酶
(P450scc) 、 3 β羟基类固醇脱氢酶(3 β 2HSD)和细胞色素 P450 17 α 2羟化酶( P450c17)的 mRNA 含量
水平 ,与正常对照组进行比较。结果 DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中 P450scc、 3 β 2HSD和
P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降 ,两组间差异比较均有统计学意义
( P < 0. 05) 。结论 DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径 ,降低了
睾酮水平 ,导致大鼠出生后尿道下裂的出现。
【关键词】 邻苯二甲酸二丁酯; 尿道下裂; 逆转录2聚合酶链反应
Establ ishment of hypospadias rat model induced by Di ( n2butyl ) phthalate and the mechanism
ZHA N G Wei , YUA N L in , WU Ting , et al . Department of Urology , The Fi rst A f f il iated Hospi tal of
Nanjing Medical Universi ty , Nanjing 210029 ,China
【Abstract】 Objective To establish hypospadias rat model induced by Di ( n2butyl ) phthalate
(DBP) and study the mechanism. Methods Pregnant Sprague2Dawley rats were gavaged with DBP at
500 mg/ kg every day as DBP2exposed group on gestation days ( GD) 12219 to estabish hypospadias rat
model and testicular RNA isolated f rom three randomly selected GD 19 fetuses per lit ter was used for real 2
time RT2PCR for the following genes : P450 side2chain cleavage enzyme ( P450scc) ,3 β 2hydroxysteroid
dehydrogenase ( 3 β 2HSD) , cytochrome P450 17 α 2hydroxylase/ C172202lyase ( P450c17 ) . Results
P450scc ,3 β 2HSD and P450c17 in the DBP 2exposed fetal testes were evidently decreased as compared
with cont rol group ( P < 0. 05) . Conclusion DBP altered gene expression of the three enzymes in the
testicular testosterone ( T) biosynthetic pathway and decreased T production ,resulting in the occurrence
of hypospadias in rat .
【Key words】 Di (n2butyl) phthalate ; Hypospadias ; Reverse t ranscription2PCR
尿道下裂是小儿泌尿生殖系统最常见的畸形之
一 ,国外发病率为 0. 3 %[1 ]
,并有逐年上升趋势。目
前 ,尿道下裂的病因仍然不明 ,考虑是遗传和环境等多
种因素共同作用的结果。邻苯二甲酸酯类化合物
(AEs) 作为增塑剂、软化剂、载体及添加剂 ,广泛应用
于塑料、汽车、服装、农药和化妆品等行业 ,各国的年生
产量呈直线上升趋势 ,由于该类化合物的脂2水分配系
数高 ,在产品的生产加工过程中 , PAEs 并未能真正与
高分子碳链聚合 ,伴随塑料制品的生产、使用和废弃过
程 ,不断地被释放至环境中去 ,在环境中难以降解 ,进
而通过呼吸、饮食、饮水、使用化妆品等方式进入生物
体并造成危害。欧盟及美日等国均已将此类化合物列
为优先控制环境污染物。在我国 ,目前使用量最大的
增塑剂为邻苯二甲酸二丁酯(DBP) 。我们应用 DBP
诱导建立尿道下裂大鼠的动物模型 ,并用逆转录2聚合
酶链反应(RT2PCR)方法进一步研究DBP导致大鼠尿
道下裂的作用及其机制。
材料和方法
1.试剂:DBP(分析纯 ,浓度:1. 04 g/ ml) ,购自 Sig2
ma公司;市售精制大豆油; TRIzol、 RT2PCR 一步法成
套试剂盒、琼脂糖、 DNA Marker 购自 Promega 公司;
细胞色素 P450 胆固醇侧链裂解酶( P450scc) 、 3 β羟基
类固醇脱氢酶(3 β 2HSD) 、细胞色素 P450 17 α 2羟化酶
(P450c17)和 32磷酸甘油醛脱氢酶( GAPDH)的引物由
江苏百龙基因有限公司合成;氯仿、异丙醇、 75 %乙醇、DEPC水均为国产分析纯试剂。
2.实验动物:SPF级 Sprague2Dawley 大鼠 ,约8 周
· 642 · 中华实验外科杂志2005 年2 月第22 卷第2 期 Chin J Exp Surg ,February 2005 ,Vol 22 ,No. 2
? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.鼠龄 ,雌性 80 只 ,体重(220 ±20) g ,雄性 40 只 ,体重
(300 ±20) g ,购自南京医科大学动物实验中心 ......
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